小鼠脑组织病理总结.ppt

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内容
0 1
石蜡切片的制作
注意事项
0 2
冰冻切片的制作
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0 3
免疫组化
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0 4
免疫荧光
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0 5
HE
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0 6
病理相关试剂配制
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01
02
03
04
05
06
取材和固定： 处死动物后或者灌注后立即切取组织块，并快速投入固定液中。
脱水和透明：梯度酒精和二甲苯
浸蜡和包埋：石蜡
切片制作：切片
贴片：捞片，展片
保存：烤片
石蜡切片的制作
取材和固定： 灌注后立即切取组织块，并快速投入固定液中，或者处死后直接冷冻。
1
脱水和透明：梯度蔗糖
2
包埋：OCT，3%聚乙烯醇。
3
切片制作：切片
4
贴片：直接贴
5
固定：冰冻丙酮3-5分
6
保存：-20°C
7
冰冻切片的制作
灌注
5%戊巴比妥钠100mg/Kg麻醉小鼠，5分钟左右小鼠麻醉好，仰卧位固定四肢，用酒精棉球擦胸腹部毛，前开皮肤暴露胸部肌肉层，剑突上成V型剪开胸廓，暴露心脏，剪掉右心耳（即视野下心脏上色暗红组织），与心尖处30°角刺入左心室，37°左右生理盐水约10ml缓慢注入，冲净血液止，换4%多聚甲醛溶液（4°预冷），10-20分钟，鼠僵硬为好。
01
4%多聚甲醛根据不同实验需求要求石蜡切片的固定时间不同，几小时到一周。
03
冲水，固定的时间越长冲水时间越长，预防甲醛沉积。
02
我曾用过2天，可以。
固定
取脑
断头，剪开皮肤拨向两侧暴露颅骨，从枕骨大孔处沿正中线剪开露骨，用镊子掰开露骨，暴露脑组织，用弯头镊将脑组织勾出，在坐标纸上根据小鼠脑图谱取相应脑区组织，厚3mm左右。
石蜡切片：75%，80%，85%，90%，95%（2个），无水乙醇（2）中每个4小时-过夜，正丁醇1-2天。二甲苯（2个）20-30分钟。三个蜡，每个大于2小时。
01
冰冻切片：固定后脱水用10%20%30%蔗糖（）每个室温下4小时——过夜，OCT包埋，先在锡纸盒冻一层，在中间放组织，切面朝下，再用OCT将组织没过，尽量减少气泡，在液氮表面，保持小盒水平，待中心尚透明时取出，放于-80°C保存。
02
脱水和透明，浸蜡
石蜡：冷水——温水（54°-56°）——
烤片（80°）
切好烤片后可以室温保存。
冰冻：切片温度-18°—-20°
直接贴
切好于冰冻丙酮中固定5分后-20°
保存。
切片
固定方法注意事项

组织标本应及时放入固定液中,切忌干涸
组织固定后必须冲洗,除去多余的固定液
一般固定剂温度以室温,某些病毒则须低温
下处理,用丙酮-20度至-40度固定30分钟
浓度采用10%中性甲醛或4%多聚甲醛
固定液量是标本体积20倍
固定时间不超过24小时