离体微繁技术.ppt

植物离体微繁技术
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主要内容
引言
微繁的一般方法
微繁中存在的问题
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一、引言
组织培养技术作为植物营养繁殖的一个新手段目前正在日益普及。这种通过无菌方法进行的无性繁殖现在通称为“微繁”,它可以用较短的时间和较少的空间,由一个个体开始产生大量的植株。
植物离体微繁的突出优点就是快速,而且材料来源单一,遗传背景较为一致不受季节和地区等限制,重复性好。离体快繁比常规方法快数万倍甚至百万倍。目前世界上已建成许多年产百万苗木的组织培养工厂,已成为一个新兴产业并国际化。离体快繁方法已在观赏植物、园艺植物、经济林木、无性繁殖作物等广泛应用。
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文心兰快繁
石斛离体快繁
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二、微繁的一般方法
微繁通常包括四个步骤:
无菌培养物的建立
茎芽的增殖
离体形成枝条进行生根
植株驯化移栽
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(一) 无菌培养物的建立
1. 外植体
在一定程度上,用于离体繁殖的外植体的性质,是由所要采用的茎芽繁殖方式决定的。
(1)取材部位为了增加生枝的数目,应当使用带有营养芽的外植体;为了从受病毒病感染的个体生产脱毒苗,就必须使用不足1mm长的茎尖分生组织作外植体。倘若母株是无毒的,最适合的外植体是带节的插条。小的茎尖外植体不但存活率不高,初期生长很慢,而且还可能使某些园艺性状消失。
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(2)取材方式
在生长季节由活跃生长的枝条上切取的外植体,通常能产生最好的效果。若把供体植株种在温室或生长箱中,使它们保持在连续进行营养生长所需的光照和温度条件下,有可能把茎芽对培养反映的季节性波动减少到最低限度。
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(3)预处理
对于需要低温、高温或特殊的光周期才能打破休眠的鳞茎、球茎、块茎和其他器官,应当灭菌消毒之前进行必要的处理。由经过11℃冷处理6~8周的水仙鳞茎上切取的茎尖,比由未经处理的鳞茎上切取的茎尖在离体培养中生长快,存活率高。
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2. 消毒
在茎段和顶芽的培养中,污染的机会较多,~1mm的茎尖进行培养,污染的机会就会减少。对于包在很多成熟叶片中的茎尖或是鳞茎中央的鳞片来说,只要把芽或鳞茎用70%酒精擦拭消毒,并小心地剥掉外层结构,解剖出来即是无菌的。用自来水把植物材料冲洗20~30min,可以显著减少微生物区系的群体数量。
消毒方法可参照外植体常规消毒方法。
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(二) 茎芽增殖的三种途径
1. 愈伤组织
利用植物细胞在培养中无限增殖的可能性以及它们的全能性,可以对若干种植物类型进行快速繁殖。在培养细胞中通过器官发生或体细胞胚胎发生都可以分化出植株。在能够适用的情况下,由愈伤组织分化发生器官常常是进行植物繁殖的最快方法。
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