第四章环境监测微生物技术
分子水平的微生物监测技术
细胞水平的微生物监测技术
微宇宙的微生物监测技术
环境质量的微生物监测技术
环境质量的微生物监测技术
水质的细菌学检验技术
大肠菌群
(一)原理
(二)方法
多管发酵法
初发酵试验
平板分离
复发酵试验
细菌总数
总大肠菌群
粪大肠菌群
膜滤法
滤膜和滤器的灭菌和安装
过滤水样
培养
计数,涂片,染色观察
再培养
细胞水平的微生物检测技术
发光细菌检测技术
(一)基本原理
(二)操作方法
(三)发光细菌检测法的应用
发光细菌
发光细菌是一类在正常的生理条件下能够发射可见荧光的细菌,这种可见荧光波长在450-490nm之间,在黑暗处肉眼可见。
多数为海洋细菌(低温,高盐)
发光机理
由细菌荧光酶(LE)、还原性黄素(FMNH2)、八碳以上长链脂肪醛(RCHO)、氧分子(02)参与:
FMNH2+LE → FMNH2·LE+ O2 → LE·FM NH2·O2 + RCHO →LE·FMNH2·O2·RCH0 → LE+ FMN +H2O+RCOOH+光
发光细菌急性毒性测试原理
外来受试物主要通过下面两个途径抑制细菌发光:
直接抑制参与发光反应的酶类活性;
抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程。
凡能够干扰或破坏发光细菌呼吸、生长、新陈代谢等生理过程的任何有毒物质都可以引起发光强度的变化。变化的程度与受试物的浓度在一定范围内呈相关关系,同时与该物质的毒性大小有关。
发光强度的变化可以用发光光度计测出。
发光细菌急性毒性测试优点
沙门氏菌回复突变试验
(一)目的和原理
(二)步骤和方法
平板掺入试验
斑点试验
TA97、TA98、TA100、TA102
脂多糖屏障丢失
R因子
紫外线损伤修复缺陷
自发回变
回变特性
(三)Ames试验的应用
Ames试验测试菌之基因型及生物学性状
菌株
自发回变
His—
rfa
pKM101
pAQ1
△uvrB
诊断试验
TA97
90~180
+
+
+
-
+
+
TA98
30~50
+
+
+
-
+
+
TA100
120~200
+
+
+
-
+
+
TA102
240~320
+
+
+
+
-
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