革兰氏染色与荚膜染色.ppt

革兰氏染色与荚膜染色
一、目的与要求:
1、掌握革兰氏染色法和细菌荚膜染色法。
2、观察菌体的一些简单结构。
二、原理及说明:
染料:用作细菌的染料是一些含有苯环为基本单位,并具有发色基和助色基的化合物,若助色基解离后带上正电荷者,能与酸性物质结合生成盐,系为碱性染料,如番红、结晶紫、孔雀绿等;反之,助色基解离后,带负电核能与碱性物质结合生成盐,称为酸性染料。一些具有两类性质的染料称为复合染料。细菌细胞等电点PH一般在2~5,能与中性,碱性及弱酸性的碱性染料结合,因此,通常采用碱性染料进行染色。
染色可分为简单染色和特殊染色。
区别:前者只采用一种染料,适应于菌体一般形态的观察;后者采用两种以上的染料,用于研究细胞内部的构造。
三、革兰氏染色法
革兰氏染色法是把细菌用两种性质不同的染料进行处理,根据细菌对染色反应的不同,可区分为革兰氏阳性(正反应)和革兰氏阴性(负反应)两大类群,故又称为鉴别染色法,这是细菌学中极重要的一种染色法。在正常情况下,某种细菌经过结晶紫染色。碘液媒染,再以酒精脱色,最后以番红复染;如不被酒精脱色菌体呈紫色,称为革兰氏阳性(常以G+表示);若为酒精脱色,则被番红色复染,使菌体呈红色,称革兰氏阴性(以G - 表示)。
四:方法步骤
1、菌株:大肠杆菌;金黄色葡萄球菌
2、流程路线:
涂片干燥固定草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥碘液媒染 1min 水洗干燥 95%乙醇脱色 15~20秒水洗干燥番红复染1min 水洗干燥镜检
(1)涂片干燥固定:
2
1
(2)草酸铵结晶紫染色1min 水洗干燥
(3)碘液媒染1min 水洗干燥
(4)95%乙醇脱色15~20秒水洗干燥
(5)番红复染1min 水洗干燥镜检
五、注意事项:
(1)在涂片时不可过厚,否则在染色脱色时,都不易均匀,固定时,不可过热,以载玻片不烫手为宜。
(2)严格掌握脱色程度,是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长,阳性菌会误为革兰氏阴性菌,时间不足,革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。
(3)在镜检时,以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。
荚膜染色法
一、原理及说明:
某些细菌生长到一定阶段,在一定条件下会向细胞壁外分泌一层粘性的多糖类物质——荚膜。荚膜含水份多。疏松且较薄。它受热易失水变形。所以,一般不加热固定。荚膜不易染色,故常用衬托染色法,即将菌体和背景着色,而将不着色的透明的荚膜衬托出来。
二、材料:钾细菌