第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相ppt.ppt

色谱分析
应用化学系
高效液相色谱的色谱柱和流动相
色谱柱
HPLC柱填料
1、全多孔球形硅胶填料最为普遍
硅胶基质分为微孔(小于2nm),中孔(2-50nm),大孔(大于50nm)硅胶,多用中孔和大孔硅胶填料
2、其它金属氧化物基质填料
TiO2、Zr O2、高分子聚合物等基质的填料,能够改善耐碱性和减弱硅羟基效应。
硅胶色谱柱填料的优势
硅胶有良好的机械强度
硅胶的孔结构和比表面积容易控制
硅胶填料具有比较好的化学稳定性和热稳定性
硅胶表面具有丰富的硅羟基,可以进行化学键合修饰
硅胶色谱柱填料的残余硅羟基效应
碱性分析物严重拖尾,分离度低。
加入碱性流动相
添加剂抑制
反相色谱柱填料保留性能随温度的变化
lnk’与1/T在一定温度范围内呈线性关系
提高硅胶基质反相色谱填料的色谱性能
提纯硅胶,利用高纯(%)硅胶色谱填料
对硅胶进行充分封端(尾)
利用空间位阻掩蔽残余硅羟基
键合相分子中嵌入极性基团(胺基、脲基、酰胺基)
双齿键合相
高效液相色谱的流动相
常用反相色谱流动相:甲醇-水、乙腈-水
常用正相色谱流动相:正己烷-异丙醇、正己烷-乙醇、正己烷-四氢呋喃
常用离子色谱流动相:稀硝酸、稀氢氧化钠
需要考虑流动相自身中紫外检测波长下的吸收强弱,溶剂紫外截止波长见表9-4。
高效液相色谱方法的选择
反相色谱可以分析多数样品。
极性极强的水溶性样品在反相色谱中保留很弱,难以有效分离,可以用正相色谱(氨基柱、二醇基柱)有机溶剂-水流动相分离。
弱酸、弱碱样品抑制电离,反相分离。
分析离子,首选离子色谱。
生物分子的分离模式有反相、离子交换、体积排阻、疏水作用、亲和色谱模式。
色谱条件的影响
色谱柱影响分离度,越长分离度越大,内径越小分离度越高。
柱填料影响分离度,颗粒越小柱效越高,分离度越大,但柱压越高(5μm到3μm柱效提高30%柱压却升高1倍)。
流动相影响保留,洗脱能力越强,分析时间越短,如:反相色谱流动相中有机组分增加保留减弱。
流速越高,保留时间越短,但柱压液越高。
柱温越高,保留时间越短,分离度有所降低。
在等度洗脱难以获得短的分析时间和满意色谱峰形时,可以进行梯度洗脱。