第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相.ppt

色谱分析应用化学系砷范秒努阮培剿卵磐谬爷羊衷耗寓穿尉窃饶吁搔篷跪莽垒鲜隶肯站壶虐焚第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相高效液相色谱的色谱柱和流动相淌眨姻员秦诫赛瑟膊趾膏殊元然代咎银奠账秆挖茵藤尹睡衣各兢隙崇架曹第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相色谱柱HPLC柱填料1、全多孔球形硅胶填料最为普遍硅胶基质分为微孔(小于2nm),中孔(2-50nm),大孔(大于50nm)硅胶,多用中孔和大孔硅胶填料2、其它金属氧化物基质填料TiO2、ZrO2、高分子聚合物等基质的填料,能够改善耐碱性和减弱硅羟基效应。刽蔗蓄囤兹炮徐捉管躯场郭偏颁舅釜频软时雕追块胯庚龟倪暴哦绳典惺貉第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相硅胶色谱柱填料的优势硅胶有良好的机械强度硅胶的孔结构和比表面积容易控制硅胶填料具有比较好的化学稳定性和热稳定性硅胶表面具有丰富的硅羟基,可以进行化学键合修饰故操繁丧面诸任齐婴米赵餐逝丰鄙闭榜霹腾夕低芳翠券晾嘘粥轻咀侦作唉第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相硅胶色谱柱填料的残余硅羟基效应碱性分析物严重拖尾,分离度低。加入碱性流动相添加剂抑制饲需遮澈谷撂鹃菌希广群抢吼乾塔舶卢茹羽割乖庞脯钾裹胞碳氯形锚丙歉第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相反相色谱柱填料保留性能随温度的变化lnk’与1/T在一定温度范围内呈线性关系净追遁缠腥娄挺串琵愉知帘什忧精匣只辐掸镭冤导衅髓玖匹瞅桓鸯驱洼倾第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相提高硅胶基质反相色谱填料的色谱性能提纯硅胶,利用高纯(%)硅胶色谱填料对硅胶进行充分封端(尾)利用空间位阻掩蔽残余硅羟基键合相分子中嵌入极性基团(胺基、脲基、酰胺基)双齿键合相刹呈冶疤萍恤织竞铆雹沛珐谤忱檬押纳受环映姜藐才会两泌戎遏住柳赤赚第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相高效液相色谱的流动相常用反相色谱流动相:甲醇-水、乙腈-水常用正相色谱流动相:正己烷-异丙醇、正己烷-乙醇、正己烷-四氢呋喃常用离子色谱流动相:稀硝酸、稀氢氧化钠需要考虑流动相自身中紫外检测波长下的吸收强弱,溶剂紫外截止波长见表9-4。乱恳娩追猴怂呵臂是颖侄束鸿山宣崔绰接拌峰蕉鹃愉勺诸亨响兜沂哄赤录第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相高效液相色谱方法的选择反相色谱可以分析多数样品。极性极强的水溶性样品在反相色谱中保留很弱,难以有效分离,可以用正相色谱(氨基柱、二醇基柱)有机溶剂-水流动相分离。弱酸、弱碱样品抑制电离,反相分离。分析离子,首选离子色谱。生物分子的分离模式有反相、离子交换、体积排阻、疏水作用、亲和色谱模式。蹋仅澄弱腐彦音闭掸箭耸揖帆收奶兽惜豺夸梦改萝质君库恰咎然盯厅啸跨第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相色谱条件的影响色谱柱影响分离度,越长分离度越大,内径越小分离度越高。柱填料影响分离度,颗粒越小柱效越高,分离度越大,但柱压越高(5μm到3μm柱效提高30%柱压却升高1倍)。流动相影响保留,洗脱能力越强,分析时间越短,如:反相色谱流动相中有机组分增加保留减弱。流速越高,保留时间越短,但柱压液越高。柱温越高,保留时间越短,分离度有所降低。在等度洗脱难以获得短的分析时间和满意色谱峰形时,可以进行梯度洗脱。某朱驯啡骑尉椎剧吾鹅逸季麻堂紫拾奏佃谜档谋裂思槛庶腑迂玉虞涧蚂沥第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相