凯氏定氮仪 凯氏定氮法.doc

凯氏定氮仪凯氏定氮法
凯氏定氮仪是根据蛋白质中氮的含量恒定的原理,通过测定样品中氮的含量从而计算蛋白质含量的仪器。因其蛋白质含量测量计算的方法叫做凯氏定氮法,故被称为凯氏定氮仪,又名定氮仪、蛋白质测定仪、粗蛋白测定仪。这种方法是由凯耶达尔在1883年发明的。
用途:主要作用是用于生化试验中。它的工作是根据蛋白质中氮的含量恒定的原理,通过测定样品中氮的含量从而计算蛋白质含量的计算。
利用此仪器进行的蛋白质含量测量计算的方法叫做凯氏定氮法。另外还有微量凯氏定氮法。
凯氏定氮法
凯氏定氮法,也可以说是一种测定蛋白质含量的方法,蛋白质为是含氮的有机化合物,可以通过测量氮的含量从而确定蛋白质的含量。可应用于食品检测等放面,操作简单,所用试剂均为常见试剂。
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。
1原理
,浓H2SO4作用下,消化生成2SO4
反应式为:2NH2(CH2)2COOH+13H2S04=(NH4)2S04+6C02+12S02+16H2
,通过蒸馏释放出NH3,收集于H3BO3溶液中反应式为:
(NH4)2SO4+2NAOH=2NH2+2H2O+NA2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量
反应式为:(NH4)2B407+H2S04+5H20=(NH4)9SO4+4H2BO2
2试剂
所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。
硫酸铜。
硫酸钾。
硫酸。
%硼酸溶液。
混合指示液:1份%甲基红乙醇溶液与5份%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份%甲基红乙醇溶液与1份%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
%氢氧化钠溶液。
硫酸标准溶液或盐酸标准溶液。
3仪器
定氮蒸馏装置:如图所示。










4操作方法
1、样品处理:精密称取固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品,移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入硫酸铜,3g硫酸钾及20毫升硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上,小火加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热小时。取下放冷,小心加20ml水,放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验。
2、按图装好定氮装置,于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
3、想接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指