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凯氏定凯氏定氮法aspanclass=.docx山东大学实验报告 2013年6月2口姓名陈少坤系年级2011级生科2班同组者张劲松科目生化实验题目微量凯氏定氮 •学会使用凯氏定氮仪并学会用凯氏定氮仪测出小油馔中的蛋白质含量二、实验原理凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热,经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程,最后有机氮转变为无机氮硫酸钱,这一过程称为有机物的消化。为了加速和完全有机物质的分解,缩短消化时间,在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂,加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解,硫酸铜起催化剂的作用。使用时常加入少量过氧化氢作为氧化剂以加速有机物氧化。消化完成后,将消化液转入凯氏定氮仪反应室,加入过量的浓氢氧化钠,将NH/转变成NH〉通过蒸憾把NH?驱入过量的硼酸溶液接受瓶内,硼酸接受氨后,形成四硼酸鞍,然后用标准盐酸滴定,育到硼酸溶液恢复原来的氢离了浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NHs的摩尔数,通过计算即可得出总氮量。在滴定过程屮,滴定终点采用甲基红•次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。测定出的含氮量是样品的总氮量,其中包括有机氮和无机氮。以廿氨酸为例,其反应式如下:NH2CH2COOH+3H2SO4=2C02+3SO2+4H2O+NH3(1)2NH3+H2SO4=(NH4)2SO4 (2)(NH4)2SO4+2NaOH=2H2O+Na2SO4+2NH3f (3)反应(1),(2)在凯氏烧瓶内完成,反应(3)凯氏蒸憎烧瓶中进行。蛋白质是一类复杂的含氮化合物,每种蛋白质都有其恒定的含氮量(约在14%〜18%,平均为16%)。凯氏定氮法测定出的含氮量,,即为蛋白质含量。三、实验用品器材凯氏定氮仪电炉消化架锥形瓶100ml(X5)量筒10ml(Xl)滴定管(5ml,)凯氏烧瓶(X2)玻璃珠吸耳球移液管(2ml,5ml,lOmIXl)试剂浓硫酸(.)硫酸钾■硫酸铜混合物:硫酸钾3份与硫酸铜1份混合研磨成粉末。40%氢氧化钠溶液:30gft氧化钠溶于蒸镭水,稀释至100mlo2%硼酸溶液:2g硼酸溶于蒸馆水,稀释至100mlo混合指示剂:%%甲烯蓝乙醇溶液按体积比4:1混合。:用恒沸盐酸准确稀释标定。四、实验步骤样品的消化(共同做的)将六个50mL的凯氏定氮烧瓶编号(在烧瓶口附近)1-3(空白),4-6(实验),1-,作为空So4-。然后用取样器各加浓硫酸4niL(取浓硫酸时勿溅到衣物和皮肤上,也不耍洒到实验桌上),用药勺加硫酸钾一硫酸铜混合物约200mg(不必称重,一点点即可),所有试剂要尽量加到凯氏定氮烧瓶的底部。烧瓶口插上小漏斗(作冷凝用),烧瓶置通风橱内的电炉上加热消化,注意先启动抽风机在消化开始吋,应控制火力,不要使沸液冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO?口烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明蓝绿色为止。消化时间为2〜3h,冷却,准备蒸憾。在消化时可以同时进行第二步。定氮仪的洗涤仪器应先经一般洗涤,再经水蒸气洗涤。蒸气发生器中装加有H2SO4的蒸憾水和数粒沸石,加甲基橙指示剂后显粉红色。加热后,产生的蒸汽经贮液管、反应