HER2_neu在乳腺癌中过表达对p53的调控及其对肿瘤细胞生长和凋亡的影响机制.pdf

复旦大学
博士学位论文
HER2/neu在乳腺癌中过表达对p53的调控及其对肿瘤细胞生长和
凋亡的影响机制
姓名:郑莉
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:朱虹光
20040420
钟导师签名:芽錾选影印、缩印或冀馥奄女手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。日期:逆生:鸿论文独创性声明论文使用授权声明本论文是我个人在导师指哥百进行的研究工作及取得盼珩究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均己在论文中作了明确的声明并表示了谢意。本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定,即。学棱有权保留送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用作者签名:
/谌橄侔┲泄泶锒詐的调控及其对肿瘸细胞生长和凋亡的影响咸餗通路,但是否通过此通路对乳腺癌细胞内泶锊中文摘要前言/怯肴死嘀琢龇⑸⒎⒄姑芮邢喙氐闹匾T┗颍谌橄侔┲泄表达率达%左右,且与不良的预后和治疗疳勺抗性有关。研究表明联合应用人源化的抗/タ寺】固錒能够有效提高化疗和放疗的敏感性,延长病人的生存期。但是研究显示淖饔没砀丛樱词故嵌訦痭过表达的患者使用瘟疲溆行室仓挥ィ崾居衅渌蛩决定治疗的有效性和敏感性。肿瘤抑制基因牟锟梢杂盏枷赴芷贕籗期的阻滞或引起凋亡。约另有研究表明抗/单克隆抗体能够下调—罚嵘橄侔┫可能通过通路作用于颍佣跋烊橄侔┫赴脑鲋澈偷蛲觯性。,魑1砥どひ蜃邮芴寮易宓囊辉保诠泶锏那榭鱿履芄患せ蛋白含量的影响及其发生的相关信号通路;并进一步探讨了上述这种改变对乳腺第一部分抗/タ寺】固宓闹票讣捌涠匀橄侔┫赴さ囊种菩目的:制备抗/タ寺】固宀⑸秆〕瞿芄灰种艸痭过表达乳腺癌—%的人类肿瘤的发生与蛲槐涠贾碌钠涞鞍撞锕δ苄远J芮相关。但是,在某些肿瘤中,虽然R吧停词チ苏5膒功能,提示有其它因素抑制了野生型钚约肮δ艿姆⒒印作为受体型蛋白酪氨酸激酶,/泶锸蹦芄辉诿挥邢赴馀涮宓那况下自身激活通路,而通路的激活与榈嫉牡蛲鍪茏栌泄亍胞内鞍椎暮浚岣叻帕坪突频拿舾行浴R陨暇崾綡术痭过表达但迄今为止,尚未见相关的直接证据。蜃H净蛲槐涞南赴芄欢訢损伤引起的览敌缘蛲霾响,进而影响细胞的增殖和凋亡,目前亦未见报道。本课题从细胞和人体组织水平研究了乳腺癌中/泶锒砸吧蚿癌细胞的增殖和放、化疗敏感性的影响,分析了/泶锏幕颊叨灾瘟产生抗性的可能机理,为乳腺癌的治疗提供了新的理论和实验依据。.
目的:探讨/泶锒詐蛋白含量的影响及其与和方法:利用原核系统表达含全长/鞍椎娜诤系鞍祝庖連痗雌性小鼠,取效价高的小鼠脾细胞与痮骨髓瘤细胞进行细胞融合。采用有限稀释法进行亚克隆;秆。幻庖咦橹А⒚庖呦赴ü夥ń锌固寮ǎ亨邕结果:成功表达及纯化出全长/鞍祝淮稳诤瞎不竦株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体在用于乳腺癌免疫组织化学检测中与商品化的抗体效果相当,且其中晗赴目固逄逋馐笛槟芄灰种艸痭过表达的乳腺癌细胞的生长。结论:成功表达和纯化含全长/鞍椎娜诤系鞍祝怀晒χ票缚笻痭单克隆抗体;自制的甑タ鼓芄挥糜诿庖咦橹Ъ觳猓荒芄灰种艸细胞生长的暝咏涣鱿赴昕梢杂米魅嗽椿哂薪细叩挠τ眉壑怠第二部分/泶锒匀橄侔┫赴鹥。蚼鞍椎挠跋探讨/泶锒訫赴鹥蛋白含量影响的可能机制。方法:脂质体介导的稳定转染方法建立/泶锏腗赴徊捎结论:/泶锬艿贾翸赴衜蛳赴四谧N唬吧第三部分,泶锞璓蚏瓜踕废碌魅橄侔┫胞野生型鞍缀细胞生长的克隆。蓝壬ǚㄉ秆∧芄灰种艸痭过表达乳腺癌细胞生长的克隆。目的:检测/泶锒匀橄侔┫赴鸐衟和鞍缀康挠跋臁觳釮痭过表达对细胞琾蛋白含量的影响,半定量检测和间接细胞免疫荧光检测/泶锒詍泶锖投ㄎ坏挠跋臁结果:获得高表达/腗赴寺一篗细胞鞍缀康陀诙哉兆未转染细胞琾蛋白含量升高,但经半定量结果显示水平无明显改变;结果显示:与细胞相比,一细胞中总蛋白水平无明显改变,但核蛋白中含量增高。细胞免疫荧光结果显示,.中鞍赘喽ㄎ挥细胞核中,而中蛋白更多定位于细胞质中。鞍缀考跎伲琾蛋白含量升高。水平:中文摘要.
和髎瓜删組芳せ畹南喙匦浴蟖踟鬗藕磐返墓叵怠方法:结论:/泶锞璓蚏瓜琩废碌魅橄侔┫赴野生型鞍缀浚酝槐湫蚿蛋白含量无明显影响。第四部分/泶锞璓范匀橄侔┫赴ず头拧⒒泼舾行方法:觳庀赴鲋臣鞍⒚顾睾蚘射线处理后的细胞活力,和染色检测阿霉素作用下细胞凋亡的改变。结果:一具有较细胞高的增殖速度,能同时抑制上述的敏感性降低;单独作用不引起细胞凋亡,但联合应用和阿霉素和湎叽砗蟮南赴盍Γ涣:嫌τ肔訫—一赴结论:乳腺癌细胞中/虻墓泶锬芄患せ頟罚贾第五部分人体乳腺癌组织材料中/泶锏南喙匦вρ芯方法:免疫组织化学ḿ觳馊橄侔┳橹衅蠬痭、检测转染/訫赴行藕抛5挤肿覣,狝,,鞍缀康挠跋欤徊捎肞藕磐芬种萍罫和种萍罸处理,观察其