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番茄的遗传转化
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摘要:本研究以小型番茄为试材,建立其以子叶、下胚轴为外植体的高效、稳定再生体系及遗传转化体系。子叶外植体与农杆菌共培养后,经过诱导,根的再生,初步建立了农杆菌介导的遗传转化体系。是目前最有效的途径之一。农杆菌对植物释放的化学物产生趋化反应,向植物受伤组织集中。经共培养后,受伤部位的化学诱导物透过农杆菌的细胞膜使Ti质粒上的Vir基因活化。Vir基因产物使Ti质粒上的T—DNA进入植物细胞,并整合到植物核基因组中。插入在T—DNA左右边界区内的目的基因也随之整合到植物染色体上,从而使目的基因在植物细胞中得到表达。近年来,农杆菌介导转化在一些单子叶植物中也得到了广泛应用。
关键字:番茄下胚轴子叶转化
一、实验材料、试剂和仪器设备
:番茄种子
:大量元素、氯化钙、微量元素、铁盐、有机成分、琼脂、蔗糖、蒸馏水、1mol∕LNaOH、6BA、NAA、升汞、蛋白胨、酵母粉、卡那霉素、75%乙醇
:天平、烧杯、量筒、移液管、药勺、称量纸、玻璃棒、吸耳球、PH试纸、培养瓶、封口膜、橡皮筋、高压灭菌锅、电炉、标签纸、记号笔、滤纸、镊子、剪子、移液枪、枪头、酒精灯、培养皿
二、实验步骤

(1) MS培养基母液的配制
按以下的成分与浓缩比例配制母液
大量元素 50mg∕L
氯化钙 50mg∕L
微量元素 1 mg∕L
有机成分 1 mg∕L
蔗糖 30 g∕L
琼脂 6 g∕L
(2)MS培养基的配置
配制200ml的MS培养基,将所需要的试剂混合后加热溶解,用1mol∕,宁大勿小偏酸不凝固,然后分装到灭好菌的培养瓶中。
(3)高压灭菌
将配制好的培养基、培养瓶、无菌水、有滤纸的培养皿灭菌
(4)铺种子
打开超净工作台紫外灯照射约30min,然后关闭紫外灯,打开超净工作台的风机。
先数好所需要的种子,放在一个小烧杯中,到入升汞,没过种子,五到六分钟。然后回收升汞,把无菌水倒入摇晃,用灭菌好的无菌水洗3—4次,拿镊子灭菌,要灭透。将种子放在灭好菌的有滤纸的培养皿中,吸干水。拿灭好菌冷却的镊子将种子接进灭好菌的8瓶培养基中,每瓶5—6粒,接完种子将培养基放在培养室中培养,发育一周左右。
结果:共培养12瓶种子,每瓶接种5颗种子,平均每瓶生长了4颗,萌发率为48∕60=80%。

(1)LB培养基的制备
根据以下配方,分别配制LB固体、液体培养基,分装后高压灭菌。
液体培养基用量:蛋白胨10g∕L 酵母粉 5g∕L 氯化钠10g∕L
固体培养基用量:蛋白胨10g∕L 酵母粉 5g∕L 氯化钠10g∕L 琼脂10g∕L
(2)倒平板
灭菌后的LB固体培养基冷却至40℃左右,加入卡那霉素,摇匀后倒入已灭菌培养皿中,冷却备用。
(3)划线
用已灭菌的接种环从保存的原菌液取一环,在已冷却的平板上划线。封好培养皿置于28℃培养箱中培养2天。
(4)摇菌
从平板上挑取单菌落,接种到20ml附加卡那霉素的细菌培养液体培养基LB中,在恒温摇床上,于28℃,180r∕—,取此时菌液,按1%—2%的比例,转入新配制的无抗生素的细菌培养液体培养基中,可在与上