ctc检测技术.ppt

ASCO Annual Report :2015 临床肿瘤学进展
液体活检引领未来十年肿瘤治疗
液体活检样本之CTCs
CTCs的概念
1896年Ashworth患者外周血中发现与原发肿瘤细胞体积和形态相似的细胞
目前CTCs定义为自发或因诊疗操作脱离实体瘤原发灶或转移灶进入外周血循环的肿瘤细胞
在肿瘤转移灶形成前即可在外周血中检测到循环肿瘤细胞
Ashworth TR. Aust Med J, 1869, 14: 146-147
Allard WJ, et al. Clin Cancer Res, 2004, 10: 6897-6904
循环肿瘤细胞的特性
Wu et Chem Lab Med 2013,
Allard, W. J. et al. Clin Cancer Res 2004;10:6897-6904
循环肿瘤细胞的特性
Mego, M, Nat. Rev. Clin.
细胞表面抗原标志物表达差异
携带不同的分子信息
转移潜力差异
异质性
循环肿瘤细胞的特性
Bednarz-Knoll,et al. Cancer Metastasis Rev (2012) 31:673–687
CTCs可以是间质型、上皮型、上皮间质混合型、成团的CTCs(CTM)
Breast Cancer:N Engl J Med 351:781-791,2004
Prostate Cancer : Lancet Oncol 10:233-239, 2009
Colorectal Cancer: J Clin Oncol 26:3213-3221, 2008
CTC对于无进展生存期与总生存期的有效预测
CTCs检测的临床可行性
实时
方便
及时
准确
微创
如何检测CTCs?
CTCs的富集:如何获取CTCs?
每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞,而10mL血液中含有的白细胞约有1亿个,红细胞有500亿个。
※从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞
CTCs的鉴定:如何鉴定所获细胞为CTCs?
※将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来
循环肿瘤细胞的检测
CTCs检测技术
Harouaka R, Kang Z, Zheng SY, et al. Pharmacol Ther. 2014 Feb;141(2):209-21.
原理
技术产品
免疫捕获法(根据细胞表面标志物)
阳性富集法:
CellsearchTM系统
CTC芯片(CTC-chip)
MACS®Cell Separation
阴性筛选法:
Easy Sep
Cyttel
过滤法(根据细胞大小)
ISET膜过滤
密度梯度离心
(根据细胞密度)
OncoQuick分离体系
流式细胞检测法
无
CTCs的检测方法及代表技术产品
免疫捕获法——磁珠分选
原理:
将特异性抗原包被在已有同源二抗的磁珠上制成免疫磁珠再与靶细胞上抗抗原结合成“靶细胞—抗原抗体—磁珠”复合物,在磁场作用下向一定方向移动,从而富集靶细胞.
分选策略
阳性富集:使用表面耦联抗目的细胞抗体的磁珠,细胞与磁珠结合后直接在磁场中被分离出来。
负性筛选:通过去除无关细胞使目的细胞得以纯化