血糖影响因素及血糖测定.ppt

【实验目的】
学习体内哪些激素对血糖浓度有影响。
学习和掌握葡萄糖氧化酶法测血糖的原理和操作方法。
【实验原理】
人和动物血糖浓度受神经、激素的调节,维持相对稳定。胰岛素和肾上腺素是调节血糖浓度的两种重要激素,前者使血糖浓度降低,后者使血糖浓度升高。
葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢,后者在过氧化物酶的作用下,能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。与葡萄糖标准溶液比较,可计算得到血浆葡萄糖浓度。
【实验试剂与器材】
速效胰岛素、盐酸肾上腺素、抗凝剂(草酸钠或草酸钾、肝素钠、柠檬酸三钠)
禁食四小时以上兔子两只
葡萄糖试剂盒(R1、R2、标准液)
酶标板、板条、微量进样器、注射器、烧杯
酶标仪、生化培养箱
【实验步骤】
注射激素前后血浆样品制备
(1)动物准备:
正常家兔两只,实验前禁食4小时以上,。
⑵取血:
在耳缘静脉处进行,用酒精棉擦拭兔耳,使血管扩张,用棉花擦干,用针筒采血或于取血处涂薄层凡士林,然后用刀片割破耳缘静脉,将血液收集于草酸钠抗凝管(每ml约需2mg草酸钠)内,边接边摇,以防凝固,取约5ml,用普通离心机2000rpm离心10分钟,取上清分装备用,编号为兔血清①、②;
⑶注射激素后再取血:
将一家兔皮下注射胰岛素(1单位/kg体重),另一只家兔皮下注射肾上腺素().,胰岛素30分钟后,按上述方法或颈静脉取血各取5ml于抗凝管内,用普通离心机2000rpm离心10分钟,取上清分装备用,编号为兔血清③、④
血浆样品萄葡糖测定
⑴工作试剂配置:
取一支试管,加入R1 。
⑵取酶标板一块,板条一条,加入板框中,设定空白管A1,,,,,(做两管取平均值,可减少实验误差)
混匀,37℃保温15min,以空白管调零,505nm波长处测定各管吸光度值。
计算血糖含量=A样/A标×标准溶液浓度
加入物(ul)
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
A10
A11
葡萄糖标准液
3
3
蒸馏水
3
兔血浆①
3
3
②
3
3
③
3
3
④
3
3
工作试剂
300
300
300
300
300
300
300
300
300
300
300
混匀置于37℃孵育箱,反应10min后,在酶标仪上进行比色测定,测定波长为492nm,用空白管A1调零,读取标准管及测定管吸光度。
【结果与计算】
血浆葡萄糖浓度= ×标准管葡萄糖浓度()