(动物传染病学实验课件)7 实验七 鸡的解剖，病料处理 和 与接种.ppt

实验七鸡的解剖、病料处理和接种
华中农业大学
动物传染病教研室
剖检在禽病诊断中的作用。
掌握病禽剖检方法和程序。
了解病料处理和接种的原则及程序。
了解病原分离鉴定的方法。
了解鸡胚的基本结构与功能及常用的鸡胚接种方法。
一、实验目的
二、疾病的诊断
依据疾病的临床症状和病理变化进行初步诊断。
对大多数传染病而言,确诊需要进行病原微生物的分离鉴定,是诊断的金标准。
可以通过对组织、分泌物和拭子等样品进行适当处理后通过快速检测方法直接检测,也可以对病原微生物的分离纯化后通过血清学方法进行鉴定。
鸡胚为活的动物机体,组织分化程度低,病毒易于增殖,可选择不同的日龄和接种途径,感染病毒的组织和液体中含大量病毒。
、镜检:出败(巴氏)、大肠杆菌病。
:细菌、霉形体、真菌可以在人工培养基上生长;病毒只能在活体动物、组织器官或细胞中生长繁殖。
:琼脂扩散试验、平板(试管)凝聚、免疫荧光、HA、HI、ELISA、病毒中和(VN)试验等。特点:微量、准确、快速、自动化。
实验室诊断
其它诊断方法
、RT-PCR、核酸探针(杂交)、基因芯片等分子生物学手段。
:饲料成份检查,钙、磷、氟、怀疑毒物分析。
:用分离到的病原是否能复制出与临床病例相同的症状?
3. 分子生物学诊断
分子生物学诊断技术是20世纪七、八十年代发展起来的诊断方法,具有特异性强、敏感性和快速等优点,例如PCR、RFLP、核酸探针技术和基因序列分析等。
可根据需要和条件选择合适的方法进行诊断。
实时荧光定量PCR
(Real-time PCR)
三、方法与步骤
细菌分离
无菌操作切取病变组织1-2g,涂于平皿的1/4
区,然后用接种针分区涂开,置37℃温箱培养。
病料处理(组织)
无菌操作取病变组织1-2g,用剪刀剪碎后移入匀
浆器,加入5ml生理盐水用匀浆器研磨均匀。取出
1ml研磨的悬液,,1000rpm
离心10min,取上清500µl(加入双抗1-5%)。