[硕士论文]组织工程技术修复兔自体气管软骨缺损的实验研究.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
组织工程技术修复兔自体气管软骨缺损的实验研究
姓名:肖开颜
申请学位级别:博士
专业:外科学(整形外科)
指导教师:曹谊林
20040501
——燮型塑塑巡壅堕猼
◎量管状组织进行组织学旧ǎ琈旧ā璒’染色、甲苯胺蓝组织工程技术修复兔自体气管软骨缺损的实验研究目的:采用气管替代物是临床上修复长段气管缺损唯一可靠、有效的治疗手段。而适宜气管移植物的匮乏一直是困扰临床的难题。为此,本实验的目的就是探讨利用组织工程技术构建兔的组织工程化管状软骨并用于修复其自体气管缺损的可行性。另外,。材料与方法:τ米橹こ碳际豕菇ㄗ橹こ袒兔耳廓软骨细胞的分离,培养、扩增:无菌、切取铝渫枚#訧徒涸。阄抡竦聪小时,收集原代细胞以畂×/赴芏冉又值脚嘌螅仍以×痗细胞密度传代,继续培养三天后,备用。,于。%ズ褪6忍件预培养∈保砉窍赴蚉纤维充分粘附后,缓慢加入嘌涸,体外培养一周,通过光镜和扫描电镜观察软骨细胞在材料支架上的粘附、增管状复合物预制:〖舻修剪其边缘,将已消毒的外径为的硅胶管置于培养皿中,,并以可吸收缝线稍作固定。暴露背阔肌筋膜,沿其表面分离,,切口常规缝合。复合物芎笕〕觯纬谥霉杞汗埽羧∩染色、阿利新蓝染色癐徒涸庖咦榛⒚庖哂ü饧觳猓冉闲律砉怯胝气管软骨在组织学方面的异同。剩余的大部分管状软骨用于兔自体气管缺损的修复。橹こ袒苄薷赐米蕴迤苋彼穑和枚稻猜鲎⑸湮彀捅韧啄/中文摘要置℃,,饱和湿度条件下培养,待细胞基本融合后,收集第一代细胞,软骨细胞一春衔镌ぶ疲菏占诙嘌天的软骨细胞,调整细胞浓度殖与基质分泌情况。裸鼠皮下预构建组织工程化气管及相关检测:乙醚麻醉裸鼠,无菌切开背侧皮肤,麻醉平稳后,颈部脱毛,常规消毒铺巾,作颈部正中切口,暴露气管上段,于气管上海第二医科大学博士学位毕业论文至
◎可见软骨细胞分泌大量胞外基质是蜘蛛网样向邻近宋卣梗诮赴嗷复合物植入裸鼠皮下芎螅尚纬砂咨ā⒅视膊织膜,管长约,壁厚约怪凰荩筇逋夤塾胪米蕴迤芟嗨苩下段第八至九环处作气管切开,插管。,将组织工程化管状软骨修剪成切除气管同等长短,原位端端吻合。,逐层缝合颈前肌、各层筋膜及皮肤。麻醉清醒后,送回动物饲养室,术后体和组织学观察以分析其可能的死因。砥苌掀は赴姆掷搿⑴×鲇泻讼赴痗细胞密度接种子事先已涂有一层明胶的培养皿内,待细胞贴壁融合后,进行光境观察,并分别对其作角蛋刚消化分离的原代软骨细胞呈圆形,接种小时后开始贴壁,小时后逐渐向两极伸展,呈三角形或多角形。焓保赴ト诤希分布均匀,胞膜清晰。原代培养天后,细胞融台达%时即可传代。:刚接种时,软骨细胞呈圆形均匀密布于宋砻婕跋宋紫吨衋小时后,细胞粘附于宋⒀仄渥葜岱较蛳蛄郊煺埂E嘌天时,接触并融合成片状,形成拉网状结构并充填于宋纬傻目紫吨小扫描电镜观察:复合物培养第焓保砉窍赴嗜切位蚨嘟切危掣讲芇纤维,基质分泌旺盛,可连接成片覆盖于砻妗管状复合物形成及大体观:体外培养第焓保筇蹇杉刺ㄎ锍示徊煌该鞯钠状结构,宋谌庋巯乱涯驯姹稹R钥晌辗煜呱宰鞴潭ê螅春衔锟捎诠杞管表面形成规则的管状结构。组织工程化气管大体观察具有一定弹韧性的管状软骨。新生软骨有完整的管腔,表面光滑,内衬一层结缔组小时可给饮水,旌蠡指匆常嗝顾丶∽天预防感染。术后每天观察动物呼吸及饮食情况。动物死亡后立即取出颈部吻台气管,作大白免疫组化、免疫荧光检测。τ米橹こ碳际豕菇ㄗ橹こ袒软骨细胞培养与扩增骨细胞贴壁快小时识嘟切危确植加谂嘌蟮住结果上海第二医科大学博士学位毕业论文
◎组织工程化气管组织学及免疫组化检测橹Ъ觳猓篐旧允咀橹こ袒茏慈砉悄诳杉罅烤确植嫉某墒烊砉陷窝,:“染色显示组织工程化气管软骨中可见大量的蛋白多糖基质分布坪焐,成熟的软倡‘陷窝清晰可见,与兔自体气管软骨着色相似;甲苯胺蓝染色显示组织工程化气管软骨中可见大量的蛋白多糖基质分布渡,成熟的软骨陷窝清晰可见,与兔白体气管软骨着色相似。三色染色显示组织工程化气管软骨内可见大量的胶原躺分布,呈条索状排列,与兔自体气管内胶原排列方式相似;阿利新蓝染色显示组织工程化气管软骨细胞呈绿色,软骨陷窝结构明晰,细胞间界限清楚,胞核呈粉红色;与兔自体气管软骨着色相似。型胶原相关检测:免疫组化检测结果显示组织工程化气管软骨中型胶原呈强阳性表达鼗粕,而阴性