[优秀论文]FasL的制备及其诱导EAE淋巴细胞凋亡的实验研究.pdf

上海第二医科大学
硕士学位论文
FasL的制备及其诱导EAE淋巴细胞凋亡的实验研究
姓名:陈兴国
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:周光炎

亡和导致的组织损伤机理研究至今未取得突破性进展。⒁灰中文摘要的制备及其诱导馨拖赴蛲龅氖笛檠芯胞膜上,通过与姆肿拥呐浣樱贡泶颋的细胞发生凋亡。表明它与自身免疫病、淋巴增生性疾病、肝炎、多发性硬化、移植排斥等疾病的发生发展有关。一般表达在激活的赴细胞、某些肿瘤细胞,及眼、睾丸、胎盘等免疫豁免区组织细人类分子是典型的型膜糖蛋白,属于肿瘤坏死因子家,编码基因是由分隔开的四个外显子组成,定位于一号染色体肿涌稍一定条件下被金属蛋白酶切割下来,与胞膜解离,形成可溶性的巴细胞的凋亡。究,但病因和机制至今未明。⑸蛲鍪悄壳把芯康娜鹊悖芯族,由霭被峁钩桑肿恿课形式。在某些疾病中,血清中有高水平的恍┳陨砻庖卟中有高效价的固澹瓒狭薋榈嫉淖陨矸从π粤青壮年严重残疾,缓解与复发交替出现。尽管进行了大量的研着针对髓鞘碱性蛋白淖陨矸从π訲细胞,由此介导了自身免疫病的发生。研究表明,的缓解与复发与这种匾多发性硬化是一种中枢神经系统脱髓鞘病变,常导致、
第三部允诱导馨拖赴蛲龅氖笛檠芯浚为了阐明瓼贛薪榈甲陨矸从π訲细胞的删除机理,我们进行了下列三部分实验。主要内容和结果如下::琒—呈现单一条带,瓸砻魉崛发生凋亡,。。随后我们再用公司的内毒素去除胶去除内毒素,进行凋亡诱导功能的检测,显示了活性,但相对较弱。馨拖赴ど螰及分子的表达,并检测了分泌的细胞因我们应用亲和层析柱,从表达的赴さ鞍壮提液中分离纯化分子。实验证明用本法纯化的分子量的膜蛋白为人。细胞学检测该蛋白能诱导表达南赴免疫活性测定:罅颗嘌琁盏急泶铮恋肀涣呀夂螅倬璑缀筒阄觯聘髁舜慷冉细叩膕蛋白,狿缬鞠示了在处有一单一条带,,分别用所制各的人及糖皮质激素甲泼尼龙诱导馨拖为我们将胞外区编码基因克隆入表达载体;蟪杆菌除,我们用人髓鞘碱性蛋白福氏完全剂,诱导小鼠,,/
础。广了一胞凋亡。信果表明:瓼贓淋巴细胞的删除中发挥了重要关键词:,亲和层析、纯秘,作用。辖峁=徊窖芯縁肿拥慕峁构δ堋⒅聘骺固逄滥科竦蛲觯淋巴细胞,多发性硬化,供了材料,为进一步的临床应用包括寻找的治疗策略打下了基实验性自身免疫性脑脊髓膜炎
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第一部分膜的纯化及其凋亡诱导功能的鉴定前言:凋亡是多细胞生物调控发育和组织平衡的重要方式。目前参与细胞凋亡的分子主要有//甊、⒌娜鹊阒话惚泶镌诩せ畹腡细胞、细胞、某些肿瘤细胞、及眼、睾丸、胎盘等组织细胞膜上,通过与肿拥呐浣樱使表达南赴⑸蛲觥人类分子编码基因是由于年发现并克隆。基因全长ㄎ挥谝缓湃旧錻,区。人是典型的型膜糖蛋白,由霭被峁钩桑馇个氨基酸,有四个糖基化位点,。研究报道赴褪芸扇苄灾刈,而对结合在细胞膜上的相当敏感【В。这可能是由于重组的人一般为原核表达,缺乏修饰及正确折叠,其结构与天然存在差异,因此活性较弱,这提示不同来源、不同结构形式的在诱导细胞凋亡时,功能不同。然而,直接研究细胞膜上的分子较为困难,由于可能会同时涉及细胞膜上其它凋亡分子。因此将细胞膜分子转变为可溶性分子,纯化后研究其结构和功能显得十分必要。本文通过亲和层析,从表达的肝肿瘤细胞膜上,提取了分子,经鉴定可有效地诱导表达腏赴蛲觫螅,
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