光动力学疗法诱导细胞凋亡机制的初步研究.pdf

华南师范大学
硕士学位论文
光动力学疗法诱导细胞凋亡机制的初步研究
姓名:吴云霞
申请学位级别:硕士
专业:光学
指导教师:邢达;陈群
20050601
一————摘要阉芫成像分析发现:未经任何处理的荧光细胞中蚘即的荧光强度无明细胞凋亡是机体生命活动中重要的细胞学事件,在许多疾病的治疗中也起着的前提下,将技术和化学发光探针运用到蛲龌淼难芯浚玫搅本文首先概述了有关光动力疗法的基本知识以及治疗肿瘤的机制,总结了细胞凋亡相关蛋白的基本信息以及与细胞凋亡通路的调节,并对技术的基本原理以及在蛋白相互作用的应用情况做了简要的描述。在第一部分的实验工作中,运用荧光共振能量转移成像技术监测在并对在凋亡前后细胞内稳定表达的荧光蛋白发射光谱的改变及探针稳定表达后在细胞内的分布情况进行了研究。实验结果显示:探针稳定表达后在细胞中细胞核和细胞质中均有分布;且细胞在凋亡前后的荧光发射光谱有明显的变化,而饔檬钡恼丈浼す舛蕴秸氲腇什⑽抻跋臁6韵赴显的改变;经【或淼南赴ü獾鞍證/谋嚷视忻飨缘脑加。荧光探针的痀的上升反应了细胞内探针成像的检测技术,可以在活细胞水平实时监测讨邢赴赾活性改变以及凋亡的启动。在第二部分的实验工作中,为研究鸬南赴蛲龅牡蛲鐾路,对亩ㄎ弧的活性及活化的动力学过程进行检测。结果发现岷系较吡L迥ど希捎诠饷糇饔玫贾碌乃鹕酥饕7⑸凋亡的最初作用靶点。砗螅琧一幢患せ睿盏嫉关键性作用。光动力学疗法是一种治疗癌症的新的技术,由它所引起细胞的死亡多以凋亡的形式发生,但由鸬南赴牡蛲龌萍捌淠诓康牡鹘过程都很复杂。本论文在充分调研国际、国内有关蛲鲅芯康睦泛徒初步但非常有意义的结果,证明这两种方法在凋亡机理研究中的可行性。本论文分三个部分详细介绍了实验工作:肿瘤坏死因子,ü鼺在光敏剂结合位点附近几个纳米的范围内,
关键词:凋亡仅有线粒体通路参与,没有死亡受体通路的介入。通过对由死亡受体所引起的活化动态过程进行监测发现,由死亡受体和参与的活化的启动还是的激活的过程都比较迅速,不到分钟就有被激活,而在分钟内就完成了对秸氲那懈罟獭S纱酥っ定位的形态学研究初步结果,发现虵伎梢杂行У乜缒ぃ⒎植荚细胞质中。虽然与姆肿恿看笮∠嗨疲瞧浣胫琢鱿赴男需要共培养分钟就可达到最大。而蛐枰9才嘌∈弊笥也糯到接近饱和。随着培养时间的继续延长直至小时,细胞内光敏剂的潴留量没用L秸隖鄄庀赴或牟投ㄎ唤⒘耸笛榛础,并将推动在细胞或亚细胞水平上进行光动力学机制以及光敏过程引起细胞凋亡机制的研究。光动力学疗法幌赴蛲觯挥ü夤舱衲芰孔R凋亡中,的启动需要∈币陨稀6赑诱导的凋亡中,无论是了甈诱导的凋亡由线粒体中介的;而在死亡受体和线粒体所介导的凋亡中,的活化的启动以及活化速度不同,由死亡受体所介导的的活化要慢于线粒体路径所介导的:线粒体是引起细胞凋亡最有效的作用靶点。技术还可运用于不同凋亡刺激下的不同凋亡通路所介导的凋亡信号的传递的差异的研究。在第三部分的实验工作中,主要介绍了和目缒ば室约跋赴却并不相同。与啾龋現淄ü赴ぃ湓谙赴誓诘匿罅袅恐有明显变化。实验中并未观测到和鏒进入细胞核的证据。该研究为利恢琢龌邓酪蜃甤:中文摘要
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第一章光动力学疗法光动力学作用的两种反应机制年,可能是因为近期的激光以及照射光源的发展,光动力学疗法才发展成为的治态氧和其它的氧自由基,这些活性氧分子易与多种生物分子反应,引起蛋白质、脂类、核酸和其它细胞组分的损伤,破坏大量的细胞,最终导致肿瘤的裂和血管渗漏;会通过在肿瘤的位置释放细胞因子和补充淋巴细胞、巨噬细胞来引起炎症反应—。用淼牡挚剐浴的主要的缺点就在于照射激光只能穿透比较浅的组光动力学作用又称为光敏化作用,只是后者多用于化学上。光动力疗法的基础是由光动力作用所引起的光化学损伤,它是光敏剂、光和氧分子三者结合,经历三步最初的反应过程后产生的一系列变化,俊U馊最初的反应是:首先,基态光敏剂囟úǔさ墓饧し⒉ハ呒し⑻在古埃及、中国和印度,人们都习惯利用光来治疗一些疾病,如白癜风、失风、牛皮