血清总胆固醇（TC）测定操作规程.docx

血清总胆固醇(TC)测定操作规程
原理
血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol),后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮,并产生过氧化氢,再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP),生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右,吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下:
胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸
胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H202
2H202+4-氨基安替比林+酚 POD 昆亚胺+4H2O
标本采集与处理
对于血脂分析,特别需要强调“分析前”各个环节的质量管理。
受检者(体检对象或病人)的准备:除总胆固醇不一定用空腹血外,测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h,不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯,近期内体重稳定,无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高,应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物,如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等,检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周,否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性观察者,还应注意采血的季节,因为血脂水平有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。
静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,因此影响血脂水平。例如站立5 min可使血脂浓度提高5%,15 min提高16%,故在采血前至少应***5min。一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1 min,穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10%~15%。
A1. 抗凝剂:我国多用血清作血脂检验。如用血浆,多主张用EDTANa2(1mg/mL)抗凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3%,EDTA用量越多,血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。
标本处理:血标本应尽快送实验室。室温下放置30min~45min后离心分离血清或血浆,置洁净试管加盖保存。在室温中放置不超过3 h,4C保存可稳定4天。置-70'C可长期保存,但不可反复冻融。
试剂
. 1 酶试剂:本科使用XX公司XX产品号试剂盒,为干粉试剂。临用前用水复溶即可使用。每瓶干粉用水XX ml复溶。复溶后试剂内各主要成分如下:

假单胞菌胆固醇酯水解酶≥800 U/L
奴卡氏菌胆固醇氧化酶≥400U/L
辣根过氧化物酶≥1000U/L
胆酸钠 3mmol/L
4—氨基安替比林
酚
聚氧乙烯表面活性剂 3g/L
总胆固醇校准血清:也由XX公司提供,产品号为XX。
试剂与校准血清的稳定性:未开瓶的试剂于4℃保存,可稳定至有效期。复溶的试剂在2℃~8℃可稳定7天,15℃-25℃可稳定3天。如在稳定期内试剂出现明显的粉红色,弃去不用o
仪器, XX型号光电比色计,具500nm~520nm滤光片。
操作
标本为及时分离的空腹血清,以及肝素或EDTA抗凝血浆。本法为终点法。测定时标本管与标准管分别加入标本与标准血清各10uL,,混匀后在37℃放置5 min,或20℃~25℃放置10min后用比色计比色,以试剂空白调零,波长500nm或520nm,颜色至少稳定60min。
计算
A测定
C= ×C0 -------------------------(A1)
A标准
式中:C——测定血清总胆固醇浓度,mmol/L;
A测定——标本管吸光度;
A标准——标准管吸光度;
Co——校准血清中总胆固醇浓度,mmol/L;
A, 操作性能
精密度:批内CV<%,批间CV<%;
准确度:以参考方法(ALBK法)定值的血清为校准品时,本法测定结果与ALBK法基本一致。
灵敏度:以酚为显色剂, —。
可报告范围:血清与酶试剂用量之比为1:100时,测定上限为13 mmol/L。
特异性:血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。一般人血清中非胆固醇甾醇约占总胆固醇的1%,在常规测定时这种影