[优秀论文]肝衰竭细胞治疗的基础研究.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
肝衰竭细胞治疗的基础研究
姓名:秦爱兰
申请学位级别:博士
专业:内科学(传染病)
指导教师:周霞秋
20040401
肝衰竭细胞治疗的基础研究第一部分:生物人工肝乳猪肝细胞的聚集培养、冻存及形态、功能观察为构建生物人工肝进行肝细胞的准备。方法采用胶原酶半原位灌流法分尿素合成功能进行检测。结果采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数培养时,肝细胞功能良好,可维持两周左右。而在未加入激素和生长因子的培养中肝细胞虽能存活一周,但功能于小时后即丧失。球形聚集培养可实现肝细第二部分大鼠肝脏干细胞纯化及增殖分化的研究进行研究;探讨生长因子及细胞外基质成份对大鼠胚胎肝脏干细胞增贿、分化的原位杂交、确椒ü鄄炱涮迥谕庠鲋场⒎只匦浴W訣天大鼠胚胎肝脏分离单个细胞,采用羧敕ḿ觳馍ひ蜃佣蕴ジ蜗赴逋增殖的促进作用,并观察生长因子及细胞外基质成分对胎肝干细胞集落形成的影响。采用免疫细胞双标记及富钚圆舛ㄒ约觳飧吻疤逑赴砻姹昙堑离单个乳猪肝细胞,并对其活力、单层、聚集培养及冻存复苏后培养的白蛋白、为±,活性超过%。在加入激素和生长因子的培养基中单层胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高。冻存复苏后肝细胞活力仍超过%,肝细胞功能与新鲜分离培养的肝细胞功能问无明显差异。结论采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本能满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求。聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝。冻存复苏后肝细胞仍功能良好。目的建立大鼠卵圆细胞增殖模型,分离纯化卵圆细胞并对其体内外增殖、分化影响。方法大鼠喂饲灰阴0被.,剂量分别为痥诘腥种糠指吻谐鹾继续给药埽扛「巫橹谐9孀橹Ч鄄欤飨赴鲋呈匝榧懊庖咦化染色。通过免疫磁珠标记粜韵赴源炕言蚕赴琈,并通过体外培养、细胞移植,采用免疫组织赴化学、中文摘要目的上海第二医科大学博士学位论文
可成功建立卵圆细胞增殖模型,卵圆细胞增殖于第较明显,至第锔叻澹第兴跎佟B言蚕赴薆旧粜裕涑泶锫言蚕赴匾煨钥乖粜韵赴谔逋庠鲋衬芰锨浚苄纬杉溲ぃ哂邢虻ü芟赴案细胞分化的双向分化潜能。经脾髓移植后,部分细胞在脾脏内向肝细胞分化,部分迁移至肝脏组织,参与肝脏的重建。肝前体细胞在体外培养时显示克隆样生长的特性。促肝细胞生长因子⒈砥どひ蜃能促进肝前体细胞一籔的表达。;ひ蜃猘愿吻疤逑赴拇僭鲋匙饔媒先酢蛔;ひ蜃狣愿吻疤逑赴脑鲋称鸬揭种谱饔谩O赴食煞徒涸ⅱ粜徒涸⒉阏沉鞍啄艽俳胃上赴涞男纬桑宋拥鞍的作用较弱。结论:籄剂量为~/时可获得满意的大鼠卵圆细胞向肝细胞分化,参与肝脏的重建。生长因子及细胞外基质对肝前体细胞的增殖、表达及向成熟肝细胞的分化能力。结果:、、/三种剂量猓斜泶锔蜗赴昙前椎鞍准暗ü芟赴昙荂E咛テ诟蜗赴乖⒘拥鞍诼言蚕赴幸嘤懈弑泶铮被贡泶镌煅8上赴昙荂—以纯化的甼阳性卵圆细胞,%以上为粜裕蟛糠諥阳性。的增殖,使铣杉铀伲⒋俳上赴涞男纬杉敖堑鞍椎鞍准癎增殖模型,增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝脏干细胞/前体细胞,利用猭标记通过可纯化这种肝干细胞/前体细胞。粜韵赴谔迥谀分化起着重要的调节作用。关键词:肝细胞肝脏干细胞生长因子上海第二医科大学博士学位论文
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肝衰竭细胞治疗的基础研究第一部分生物人工肝乳猪肝细胞的聚集培养、冻存及形态、功能观察引起。针对这一疾病,目前尚无特别有效的治疗方法,仍以综合支持治疗为主。近几年开展的较为有效的治疗方法主要有人工肝、肝细胞移植和肝移植。由于肝脏供体来源严重短缺,肝衰竭患者中只有极少数人有机会接受肝移植早在年代,人们就试图用人工肝脏来替代严重肝病患者衰竭的肝功能,但受难以有效地代偿肝功能。物理型人工肝如血液灌流可有效吸附肝衰竭患者血液中间的一类中间型装置,包括血浆置换、交换输血及整体洗涤等,其中以没最为常用,可去除与血浆蛋白结合的大分子物质缒诙舅及中、小分子物质,现过敏反应,置换过程中同时去除了患者机体内有益的物质。生物型人工肝是胞等与生物合成材料相结合组装成某种形式的,它不仅具有肝脏特异性的解毒功能,而且具有更高的效能,如参与三大物质代谢、具有生物转化功能、可清除毒性物质、能分泌具有促进肝细胞生长活性的物质等,可弥补物理型和中间言急、慢性肝衰竭是一种病死率极高的临床综合症,在我国主要由病毒性肝炎术。加之肝移植后需长期服用免疫抑制剂,亦使相当一部分患者难以承受。因此技术条件及方法的限制,加上肝脏功能十分复杂,早期的人工肝装置以解毒为主,的毒性物质,血液透析/滤过能有效地去除