实验室常用试剂、缓冲液的配制方法.doc

实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1MTris-HCl(,,)组份浓度配制量配制方法1MTris-。,充分搅拌溶解。。。,室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,。-HCl()组份浓度配制量配制方法-。,充分搅拌溶解。。。,室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,。10×TEBuffer(,,)组份浓度配制量配制方法100mMTris-HCl,,置于1L烧杯中。,均匀混合。,高温高压灭菌。。3M醋酸钠()组份浓度配制量配制方法PBSBuffer 组份浓度配制量配制方法137mMNaCl,,10mMNa2HPO4,,置于1L烧杯中。,充分搅拌溶解。,然后加入去离子水将溶液定容至1L。,室温保存。注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,。10M醋酸铵 组份浓度配制量配制方法~200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。。。。注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚 配制方法 :大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,,苯酚平衡操作方法如下:①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相。③加入等体积的1MTris-HCl(),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。④重复操作步骤③。⑤-HCl(),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。⑦。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法 :从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。10%(W/V)SDS2NNaOH 组份浓度配制量配制方法~200ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。,边加边搅拌。,用去离子水将溶液体积定容至100ml。,室温保存。 组份浓度配制量配制方法.