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免疫球蛋白的提取方法
根据猪血中含有的各种蛋白质的分子大小、 电荷多少、 溶解度以及免疫学特
征等 ,从血液中提取免疫球蛋白 ,常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、有机聚合物
沉淀法、变性沉淀法等。
免疫球蛋白的提取盐析法 盐析法是分离蛋白质的重要方法之一 ,是利用抗
体与杂质之间对盐浓度敏感程度的差异性进行的。 选择一定浓度范围的盐溶液使
部分杂质呈“盐析”状态 ,抗体成分呈“盐溶” 溶解状态。离心去除盐析沉淀状
态的杂蛋白 ,得到的上清液再选择一定浓度范围的盐溶液使抗体成分呈盐析状态 ,
离心得到的沉淀物即为纯化的目标抗体。 目前常用的盐析法有饱和硫酸铵分步盐
析法、辛酸沉淀法、氯化铁沉淀法、多聚磷酸盐盐析法等。饱和硫酸铵分步盐析
硫酸铵是盐析法最常用的无机盐 ,主要原因是它溶解度大 ,随温度变化小 ,对蛋白
质有保护作用 ,高浓度时可抑制微生物和蛋白酶的活性 ,价格也不贵。
免疫球蛋白的饱和硫酸铵分步盐析法操作简单 ,对设备和操作条件要求不高 ,
便于工业化生产。其具体步骤为 :取一定量血浆 ,加生理盐水稀释 ,边搅拌边 缓慢
加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度 20%,4℃静置 1h,4000r/min 离心 10min,弃沉
淀 ,上清液中继续加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度 50%,浓氨水调 pH 值至
,4℃静置 2h,4000r/min 离心 20m 弃上清 ,将沉淀溶于生理盐水 ,超滤除盐浓 缩,
滤液中无 S2- 4 为止 ,即得 IgG 粗提物。
免疫球蛋白的辛酸沉淀法 辛酸沉淀法提取 IgG 时,对设备和操作条件要求较
高 ,在离心时 ,转速为 10000 r/min, 普通离心机达不到要求。在调节溶液 pH 值时 ,
要控制得当 ,pH 值稍低或稍高对 IgG 的得率和纯度都有很大影响 ,这些都限制了
它的广泛应用。其具体步骤 为:取一 定量  调 pH 值至 ;室温下边搅拌边
缓 慢 加 入 辛 酸 ( 按 辛 酸 25 μ l/mL 血 清 混 合 液 添 加 ), 继 续 搅 拌 30min
后 ,10000r/min 离心 30min,弃沉淀 ,留上清液 ,上清液用多层纱布过滤 ,留滤液 ,然后
将滤液装入透析袋中析 48h,每 8~10h 换一次透析液 ,最后超滤浓缩即得 1gG 粗提
液。
免疫球蛋白的氯化铁沉淀法 氯化铁沉淀法的原理是据蛋白质分子与金属离
子反应形成盐复合物的形式和种类的不同 ,达到分离不同蛋白质的目的。其具体
步为 :取一定量 的血浆 ( 加抗凝剂 ), 用生理盐水稀释后 ,边搅拌边缓加入三氯化铁
溶液 ,调 pH 值至 ,搅拌混 ,40℃水浴保温 60min 后 ,4000r/min 离心 15min,弃去 沉
淀 ,上清液调 pH 值至 ,常温静置 2h,离心去沉淀过滤 ,上清液经超滤浓缩即得
IgG