高效液相色谱仪的使用方法及注意事项.docx

高效液相色谱仪操作步骤:
1) . 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。
2) . 对抽滤后的流动相进行超声脱气 10-20 分钟。
3) . 打开 HPLC工作站 (包括计算机软件和色谱仪), 连接好流动相
管道,连接检测系统。
4) . 进入 HPLC控制界面主菜单,点击 manual,进入手动菜单。
5) . 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样
阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在
manual 菜单下,先点击 purge ,再点击 start ,冲洗时速度不要超过
10 ml/min 。
6) . 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越
大,压力越大,一般不要超过 2000。点击 injure ,选用合适的流速,
点击 on,走基线,观察基线的情况。
7) . 设计走样方法。点击 file ,选取 select users and methods ,
可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击 new
method。选取需要的配件, 包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而
不同。选完后,点击 protocol 。一个完整的走样方法需要包括: a.
进样前的稳流,一般 2-5 分钟; b. 基线归零; c. 进样阀的
loading-inject 转换; d. 走样时间,随不同的样品而不同。
8) . 进样和进样后操作。选定走样方法,点击 start 。进样,所有
的样品均需过滤。方法走完后,点击 postrun ,可记录数据和做标记
等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
9) . 关机时,先关计算机,再关液相色谱。
10) . 填写登记本,由负责人签字。
高效液相色谱仪使用注意事项:
1、泵正常工作时, 在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的,
当然在换流动相时压力变化是正常的, 正常情况下如果柱压升高基本
上都是由色谱柱使用时间长引起的(只有更换色谱柱) ,如果正常情
况下压力突然降低有可能是( 1)接头处有漏液的地方,采取的方法
是有滤纸检查, 如有漏液的地方用扳手拧紧即可。 如果没有漏液则可
能是( 2)白色的管子里面有气泡从而导致流动相进不到泵里面去,
采取的方法是排气泡排气时:先 STOP 停泵—打开排气阀—按
PURGE (快冲)键—等气泡排完后先 STOP 停泵—拧紧排气阀,其
先后步骤不要搞反了。
2、泵正常工作时最高压力最好不要超过 200KG ,所以打开泵以后可
以将泵的最大压力调到 200KG,这样如果压力超过上限则会自动报
警停机,流速最好不用超过 1ML/MIN ,如果使用时压力超过 200KG ,
建议将流速调低点以降低压力(在色谱柱正常的情况下) ,如果是因
为色谱柱长时间使用造成压力升高则建议更换色谱柱 (因为色谱属于
耗