高效液相色谱法测定胀果甘草中甘草酸的含量.doc

高效液相色谱法测定胀果甘草中甘草酸的含量.doc高效液相色谱法测定胀果甘草中甘草酸的含量
【关键词】甘草
甘草为豆科植物甘草(glycyrrhiza uralensis fisch)、胀果甘草(glycyrrhiza inflata bat)或光果甘草(glycyrrhiza glabra l)的干燥根及根茎,始载于《本经》,药用历史悠久。其功能补脾益气、润肺止咳、缓急止痛、清热解毒、缓和药性。主要含有甘草酸及甘草苷类成分,其中甘草酸为现代药理应用研究证实具有抗纤维化、抗炎、抗病毒和保肝解毒及增强免疫功能等作用[1]。目前针对甘草的内在质量控制,主要围绕甘草酸成分进行定性、定量一类的检查。2005版《中国药典》收载了RP-HPLC 三元等度洗脱法测定甘草酸的方法,规定甘草酸含量不得低于2%[2]。本实验依托2005版《中国药典》一部甘草酸含量测定(附录VID)项下操作主线,采用RP-HPLC法测定甘草酸的含量,方法简便、快速,重现性好,结果稳定,用于甘草酸的检测专属性强,
1 仪器与试剂
仪器
Agilend 1100 系列液相色谱仪、四元泵、在线真空脱气、DAD 检测器、化学工作站、1200型自动进样器。
试剂
甘草酸单铵盐(monoam0nium glycyrrhitinate)对照品(中国药品生物制品检定所);甘草(glycyrrhizain flata bat)样品,产地新疆(华东医药股份有限公司);甲醇(色谱纯)、醋酸铵(分析纯)、冰醋酸(分析纯)、水(双蒸水)。
2 实验方法与结果
色谱条件
美国ZORBAX Exund C18分析柱(×250mm,5μm)为固定相;甲醇--冰醋酸(67∶33∶1)为流动相;检测波长250nm;流速1ml·min-1;柱温为室温。柱效以甘草酸计,理论塔板数不应低于2000。结果被测成分于7min 内即可出完,三元等度洗脱全程为0~20min。记录的色谱图结果见图1,2。

对照品溶液的制备
精密称取80℃,置100ml量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,摇匀,使成每ml含有甘草酸单铵盐1 mg对照品溶液。
供试品溶液的制备
取甘草,研细(过3号筛),置烘箱内80℃干燥至恒重,,置100ml量瓶中,加流动相约45ml,超声处理(功率250in,取出,放冷,加流动相至刻度,摇匀,微孔滤膜()滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
测定方法
精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,以对照品溶液色谱图中甘草酸的峰面积(3次平均)外标法计算甘草中甘草酸的含量(%,l于100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,分别进样10μl,记录峰面积。以进样量(μg)为横坐标(X),峰面积(A)为纵坐标(Y),绘制标准曲线。甘草酸回归方程为Y=+ r=,~。
重现性试验
,分别精密吸取10μl进样,记录峰面积,结果甘草酸 RSD=%。
回收率测定