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抗坏血酸( Vc)的测定方法
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测定 Vc 的国标方法中, 荧光法为测定食物中 Vc 含量的第一标准方法, 2、 -二硝基苯肼法作为第二法。
一、 荧光法

)
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺( OPDA 反应生成具有荧光的喹
喔啉( quinoxaline ), 其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血
酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法
的最小检出限为  g/ml 。

GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定

3. 。
3.  350nm及 430nm波长的荧光计。
3. 。

本实验用水均为蒸馏水,试剂不加说明均为分析纯试剂。
(1)偏磷酸-乙酸液:称取 15g 偏磷酸,加入 40ml 冰乙酸及 250ml 水,搅拌,放置过夜使之逐渐溶解,
加水至 500ml。4℃冰箱可保存 7~10 天。
・
(2) mol/L 硫酸:取 10ml 硫酸,小心加入水中,再加水稀释至 1200ml。
(3)偏磷酸-乙酸-硫酸液:以  硫酸液为稀释液,其余同 . 配制。
(4)50% 乙酸钠溶液:称取 500g 乙酸钠( CH3COONa3H2O),加水至 1000ml。
(5)硼酸 - 乙酸钠溶液:称取 3g 硼酸,溶于 100ml 乙酸钠溶液(  )中。临用前配制。
(6) 邻苯二胺溶液:称取 20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至 100ml。
(7) % 百里酚蓝指示剂溶液:称取  百里酚蓝,加  氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研
磨至溶解,氢氧化钠的用量约为  ,磨溶后用水稀释至 250ml。
变色范围: pH= 红色
pH= 黄色
pH> 兰色
(8) 活性炭的活化:加 200g 炭粉于 1L 1+9 盐酸中,加热回流 1~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子
为止,置于 110~120℃烘箱中干燥,备用。
(9)标准
抗坏血酸标准溶液( 1mg/ml):准确称取 50mg抗坏血酸,用溶液(  )溶于 50ml 容量瓶中,并稀释
至刻度。
抗坏血酸标准使用液( 100μ g/ml ): 取 10ml 抗坏血酸标准液,用偏磷酸 - 乙酸溶液稀释至 100ml。定容
前试 pH值,如其 pH> 时,则应用溶液(  )稀释。
标准曲线的制备:取下述 " 标准 " 溶液(抗坏血酸含量 10μ g/ml )  、 、 和  标准系列,取
双份分别置于 10ml 带盖试管中,再用水补充至  。
5. 操作步骤
 样品制备
全部实验过程应避光。
称取 100g 鲜样,加 100g 偏磷酸 - 乙酸溶液,倒入打碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱
度。如呈红色,即可用偏磷酸 - 乙酸溶液稀释,若呈黄色或兰色,则用偏磷酸 - 乙酸 - 硫酸