【优秀论文】消化性溃疡、胃炎与胃癌幽门螺杆菌蛋白质组的差异分析.pdf

北京大学
博士学位论文
消化性溃疡、胃炎与胃癌幽门螺杆菌蛋白质组的差异分析
姓名:张静
申请学位级别:博士
专业:内科学(消化系病)
指导教师:林三仁;丁士刚
20060401
北京大学医学博士学位论文
缩略语表
Abbreviations
英文缩写英文全称中文名称
Helicobacter pylori 幽门螺杆菌
2-DE two-dimensional gel electrophoresis 双向电泳
IPG immobilized pH gradient 固相化 pH 梯度
IEF isoelectric focusing 等电聚焦
SDS-PAGE SDS-polyacrylamide gel electrophoresis SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳
ESI-MS electrospray ionisation mass spectrometry 电喷雾电离质谱
MALDI-TOF-MS matrix assisted laser desorption ionisation 基质辅助激光解吸电离
-time of flight mass spectrometry 飞行时间质谱
ESI-Q-TOF electrospray ionisation -quadrupole-time 电喷雾-四极杆-飞行
Of flight mass spectrometry 时间质谱
CapLC capillary liquid chromatography 毛细管液相色谱
CID collision induced desorption 碰撞诱导离解
PMF peptide mass fingerprinting 肽质量指纹图
PST peptide sequence tag 肽序列标签
SDS sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠
PMSF phenylmethyl sulfonylfluoride 苯甲基磺酰氟
DTT dithiothreitol 二硫苏糖醇
TBP tributyl phosphate 三丁基膦
IAA iodoracetamide 碘乙酰胺
AP ammonium persulfate 过硫酸铵
ACN acetonitrile 乙腈
TFA trifluoroacetic acid 三氟乙酸







北京大学医学博士学位论文
消化性溃疡、胃炎与胃癌幽门螺杆菌蛋白质组的差异分析
北京大学第三医院消化科
研究生:张静
导师:林三仁教授
副导师:丁士刚主任医师
中文摘要
目的:通过从临床活检胃粘膜组织中分离培养幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,
),建立较好的 双向电泳样品制备方法;确立适合 双向
电泳样品蛋白定量的方法;建立完善的 菌体蛋白双向电泳操作流程;通
过比较分析和质谱鉴定,初步确定胃癌和消化性溃疡、胃炎 蛋白质差异
点。
方法:选择 2005 年 3 月至 2005 年 9 月经我院胃镜及活检证实为胃癌、消化
性溃疡和胃炎患者(胃粘膜组织经快速尿素酶检查为阳性)的胃窦、胃体粘膜各
一块,通过匀浆接种法于哥伦比亚选择性固体培养基、微需氧条件下培养
72 小时,经过形态学、快速尿素酶、革兰氏染色油镜下观察鉴定细菌后,再经
细菌传代、保存液低温液态保存、哥伦比亚选择性固体培养基复苏 ;应
用裂解液、超声破碎法提取 菌体蛋白质后经 Bradford 法进行菌体蛋白质
定量,采用双向电泳方法获得 菌体蛋白质图像经过银染和考马斯亮兰染
色法,运用 Imagemaster 图像分析软件找到胃癌与消化性溃疡、胃炎 的
差异蛋白质,通过胶内酶解,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
(MALDI-TOF)和四极杆飞行时间电喷雾串联质谱(Q-TOF)鉴定差异蛋白质。
最后,通过 mascot 数据库检索差异蛋白质。
结果:共取材 53 例进行培养,其中胃癌 21 例、胃溃疡 12 例、胃炎 20 例。
17 例 生长,其余 36 例在 72 小时内未生长或培养污染。临床分离标本原
代培养 检出率为 %。培养阳性的 17 例中,选择胃癌、胃溃疡和胃
炎各 4 例(共 12 例)同时进行 复苏,10 例