4-高效液相色谱法.ppt

第四章高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
本章要求
⒈了解高效液相色谱法的优缺点
⒉了解高效液相色谱仪的结构
⒊掌握常用检测器的原理及应用范围
定义:以液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC):20世纪60年代末70年代
技术:高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器
特点:速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化
一、概述
高效液相色谱法简介


⑴高速:HPLC分离效率高,速度快,一次几分钟和几十分钟就可完成。色谱柱的寿命长,可达两年以上。
⑵高效:HPLC高压(2~6 MPa)下操作,填料颗粒小(2~50 m),规则均匀的固定相,传质阻力小,柱效高(N=4000~60000 块/m),分离效率高。
⑶高灵敏度:现代高效液相色谱仪普遍配有高灵敏度检测器,使分析灵敏度比经典色谱有大提高(紫外检测器最小检测限可达10-9 g;荧光检测器最小检测限可达10-11~10-13 g。
⑷高自动化:HPLC进样量小(X~X0 L)。带有自动进样装置和工作站。

⑴适用范围
GC适用于沸点低、热稳定性好、中小分子量的化合物,HPLC不受此种限制。气相色谱一般都在较高温度下进行,而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。
⑵流动相
GC流动相仅运载样品,不起分离作用,但无毒,易于处理。而HPLC流动相除了运载样品外,还有分离作用,可改变流动相组成,进行有效的分离。但流动相一般有毒,费用高。
⑶色谱柱
GC柱很长,特别是毛细管柱可长至几十米至上百米,柱效很高(理论塔板数N=104~106)。HPLC柱较短,一般为15~25 cm,柱效(理论塔板数N=103~104),低于GC柱。
⑷检测器
与GC相比,HPLC检测器种类较多。
⑸制备色谱
GC难以制备样品,因为进样量小,难以收集或被破坏。HPLC可进行制备,即制备色谱。
一﹑高效液相色谱仪的结构
高效液相色谱仪
一般分为4个主要部分:高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置:如梯度洗脱、自动进样及数据处理等。
工作过程如下:
首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入
色谱柱,然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样
品时,流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱
柱进行分离,然后依先后顺序进入检测器,记录仪将检
测器送出的信号记录下来,由此得到液相色谱图。
数据分析系统
输液系统
进样系统
分离系统
检测系统
HPLC的系统组成
数据处理系统