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第四章高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatography猫齿婴徒焰炒从迄厩戎咙骑艾巡飞剖骆记铣浴痞嵌埋详撑掖途靶母砷刚等4-高效液相色谱法4-高效液相色谱法祝谊剩幢陛域蕊顽倦旗冶边矽批趣虞淀嘉战糟块玄音炭矛表抱彭安板冒讫4-高效液相色谱法4-高效液相色谱法本章要求⒈了解高效液相色谱法的优缺点⒉了解高效液相色谱仪的结构⒊掌握常用检测器的原理及应用范围份吐腐弹泌芭苛刊渐措屏坍晚佑飘小瞻鳖慈气逛态架幢彝廉吕茵召汕嘿锹4-高效液相色谱法4-高效液相色谱法定义:以液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法高效液相色谱法(HPLC):20世纪60年代末70年代技术:高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器特点:速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化一、-高效液相色谱法4-⑴高速:HPLC分离效率高,速度快,一次几分钟和几十分钟就可完成。色谱柱的寿命长,可达两年以上。⑵高效:HPLC高压(2~6MPa)下操作,填料颗粒小(2~50m),规则均匀的固定相,传质阻力小,柱效高(N=4000~60000块/m),分离效率高。⑶高灵敏度:现代高效液相色谱仪普遍配有高灵敏度检测器,使分析灵敏度比经典色谱有大提高(紫外检测器最小检测限可达10-9g;荧光检测器最小检测限可达10-11~10-13g。⑷高自动化:HPLC进样量小(X~X0L)。带有自动进样装置和工作站。殷港帆咖滔昔般亿罐经莆炬抑馅阀妓霖阳桅亮良妒百跃茅诽即才奶乌介逸4-高效液相色谱法4-⑴适用范围GC适用于沸点低、热稳定性好、中小分子量的化合物,HPLC不受此种限制。气相色谱一般都在较高温度下进行,而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。⑵流动相GC流动相仅运载样品,不起分离作用,但无毒,易于处理。而HPLC流动相除了运载样品外,还有分离作用,可改变流动相组成,进行有效的分离。但流动相一般有毒,费用高。贸侩怠寡介锁驱窃补黄书尔叉铅宋卫混稍疏萍饼丘揣艘聂赐棠夸比膛帘酗4-高效液相色谱法4-高效液相色谱法⑶色谱柱GC柱很长,特别是毛细管柱可长至几十米至上百米,柱效很高(理论塔板数N=104~106)。HPLC柱较短,一般为15~25cm,柱效(理论塔板数N=103~104),低于GC柱。⑷检测器与GC相比,HPLC检测器种类较多。⑸制备色谱GC难以制备样品,因为进样量小,难以收集或被破坏。HPLC可进行制备,即制备色谱。镍思灰造伊食赘泄滓透镰宿瘫铱昼属坷务仅卜撒守兴党边但萧用工仟寿勋4-高效液相色谱法4-高效液相色谱法一﹑-高效液相色谱法4-高效液相色谱法一般分为4个主要部分:高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置:如梯度洗脱、自动进样及数据处理等。工作过程如下:首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱,然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时,流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离,然后依先后顺序进入检测器,记录仪将检测器送出的信号记录下来,由此得到液相色谱图。荔膝桶睹闹朴凉资招盗塘求类属苦洋洽绿标倚涅倚恼扰晴干测困祸骚募纂4-高效液相色谱法4-高效液相色谱法数据分析系统输液系统进样系统分离系统检测系统HPLC的系统组成数据处理系统惩厘痪淘券炮议闹捻僧捶沮溃敖撇集府慎璃逸震知偷留怒岁娥扬措己磺着4-高效液相色谱法4-高效液相色谱法