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液相色谱工作总结
篇一:高效液相总结
高效液相色谱中的速率理论
范氏方程:H=A+Cu
A = 2λdp 在 HPLC中为了降低涡流扩散的影响:采用了3-10um的小颗粒球形固定相采用高压匀浆
Cd-为常数
Cs-常数 Bu?CdDm
u
Ds-为组分在固定相中的扩散系数
df_ -为固定液涂层厚度 Hs?CSdfuDs2
在HPLC中,流动相是液体其粘度比气体大得多,而且是在室温下进行操作。因此组分在流动相中的扩散系数Dm比GC中的Dg要小得多。另外HPLC流动相的流速快,所以纵向扩散项对谱带扩张的影响很小,可以忽略不計。故在H-u曲线中没极小值
根据速率理论HPLC的实验条件为:
、均匀的球形化学鍵合相;,流速不宜快;
流动相
在高效液相色谱中所用的流动相也称洗脱剂,溶解样品用的溶剂最好就是洗脱剂。由于高效液相色谱中流动相是液体,它对组分有亲和力,并参与固定相对组分的竞争。因此流动相不仅起洗脱作用,还参与分离过程,在固定相一定时,
HPLC中,n由色谱柱质量决定,α主要受溶剂种类的影响,κ受溶剂配比的影响。若固定相一定,改变流动相的组成就可以r21使改变;改变流动相中各种溶剂的配比,就能有效地控制k值。用分离方程讨论流动相对分离的影响注意HPLC与GC
不同
在HPLC中,当固定相一定时,流动相的种类影响选择因子,配比影响容因子。因此,正确选择流动相直接影响组分的分离度。在GC中,流动相是惰性的,它对组分没有作用力,仅起运载作用,因此,α主要受固定相性质影响,κ主要受柱温影响,在GC中,以选择固定相和改变柱温来改善分离度。
(1)不允许使用能引起柱效能损失或柱保留特性变化的溶剂。(
2)溶剂对于试样,必须具有适当的溶解度和良好的选择性。3)溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器,应注意选择检测波长比溶剂的紫外截止波长要长。对于折光率检测器,要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相,以达最高灵敏度。(4)溶剂的纯度要高,使用前应过滤、脱气(5)溶剂的化学稳定性好。不能选用与样品发生反应或聚合的溶剂。(6)尽量使用低粘度的溶剂。
常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用,例戊烷、乙醚等,它们易在色谱柱或检测器内形成气泡,影响分离.
:在色谱过程中,溶剂的组成、配比不变。适用于组分数目少、性质差别不大的试样的分离分析。:在色谱过程中,可按一定程序连续地或阶段地改变流动相的组成,使一个复杂混合物的样品中的性质相差较多的组分都能获得适宜的容量因子。
梯度洗脱的优点:
,,, 。缺点:一液一固吸附色谱法(LSC 该法有利于不同族化合物的分离,对不同异构体的分离选择性远比其他色谱方法好
1固定相
硅胶氧化铝聚酰胺
硅胶的吸附性是由硅胶表面的硅羟基产生的。硅胶如吸附水,可使吸附能力降低;升温可以除去吸附的水,使硅胶活化。为了能有适当的保留值并得到较好的分离,极性弱的试样应使用活性较高的吸附剂;极性强的试样应使用活性较低的吸附剂。进行色谱分离时,流动相若有水分,会降低吸附剂的吸附活性。
2流动相
在吸附色谱中选择流动相的原则:
极性大的试样往往采用极性强的洗脱剂;极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱剂的极性强弱可用溶剂极性参数(P)来衡量。P越大,表示洗脱剂的极性越强,洗脱能力越大。例如:正烷P=,极性最小;水P=极性最大。实际工作中常用混合溶剂,以改分离效果。溶剂极性参数应调节到使被测组分的容量因子在2-5的最佳范围。
P??P???P?????abaabb式中,Pa’Pb’分别为溶剂A、B溶剂极性参数,фa、фb分别为溶剂A、B在混合溶剂中的体积分数。
二液一液分配色谱法(LLPC)
该法能适用于各种样品的分离和
分配系数较大的组分,保留值也较大,后出峰;分配系数较小的组分,保留值也较小,先出峰。
+固定液
载体:是惰性物质,仅起负载固定液的作用。固定液:是有机溶剂。
最常用固定相
(强极性固定液) 聚乙二醇(中等极性) 角鲨烷(非极性)
主要优点:
,无液坑,传质快,故柱效高。,适用于梯度洗脱。
、重现性好、分离的选择性高。特别适用于分离容量因子k值范围宽的样品。
。由于键合到载体表面的官能团可以是各种极性的,因此它适用于种类繁多样品的分离,是应用最广泛的固定相。用来制备键合固定相的载体,几乎都用硅胶。利用硅胶表面的