CRISPR-enomeEditingandCancerModelingCRISPR-Cas9系统的原理crRNA(CRISPR-derivedRNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activatingRNA)结合形成tracrRNA/crRNA复合物,此复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。而通过人工设计这两种RNA,可以改造形成具有引导作用的sgRNA(shortguideRNA),足以引导Cas9对DNA的定点切割。2015/2/52CRISPR-Cas9系统的原理2015/2/53sgRNAtarget通过设计sgRNA来确定剪切位点设计简单快速,无需重复构建核酸内切酶Cas9的局限性受限于转基因范围,Cas9往往只用与细胞或胚胎层面的实验。本实验采用Cre-dependentRosa26Cas9knockinmouse克服了这个局限性。使得CRISPR-Cas9应用更广泛。2015/2/54Cre-dependentCas9Rosa26targeting矢量图2015/2/55荧光蛋白Rosa26,使转录可被诱导转入Cas9后与野生小鼠对比2015/2/562015/2/57神经系统荧光对比三种实验测试效果:三种转接方法:纳米粒子、腺病毒转导、慢病毒转导。三个系统(器官):免疫、神经、肺(癌)。2015/2/58一、慢病毒转入树突状细胞2015/2/59——转入树突状细胞实验过程2015/2/510通过荧光蛋白EGFP可以鉴别Cas9是否转导成功
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