角蝇体内斯氏副柔线虫观察及COI基因特异性序列分析.doc

分类号 S852 学校代码 10129
U D C 学号 08201072
角蝇体内斯氏副柔线虫的观察及 COI基因特异性序列分析
Observations of Parabronema skrjabini in Horn Flies and
Analysis of Its Specific Sequences within COI gene
申请人:李文生
学科门类:农学
学科专业:预防兽医学
研究方向:兽医公共卫生学
指导教师:杨莲茹教授
论文提交日期:二〇一一年五月
摘要
斯氏副柔线虫(Parabronema skrjabini)是一种寄生于骆驼皱胃的寄生性线虫,
其中间宿主是西方角蝇( Haematobia irritans) 和截脉角蝇( Haematobia
titillans)。为了明确我国双峰驼养殖地区斯氏副柔线虫对角蝇的感染情况、寄生
部位,斯氏副柔线虫所在副柔属的归科问题,以及寻找一种适合于该病生前诊断方
法的遗传标记。本文统计了双峰驼生活环境中角蝇体内斯氏副柔线虫的感染率和感
染强度,明确了其寄生部位;并利用 PCR 技术扩增分析了斯氏副柔线虫线粒体 DNA
的 COI基因序列,在此基础上设计出了特异性引物并加以验证。结果如下:
采用生物解剖法对采集于内蒙古巴彦淖尔市乌拉特后旗的 176只角蝇(西方角
蝇 64只,截脉角蝇 112只)进行了剖解,共有 38只为阳性,感染率为 %。其
中西方角蝇中 13 只为阳性,感染率为 %,最大感染强度为 32 条/只,平均感
染强度是 8条/只;截脉角蝇中 25只为阳性,感染率为 %,最大感染强度为 23
条/只,平均感染强度是 9条/只。斯氏副柔线虫幼虫主要寄生在角蝇的消化道内。
利用 PCR方法,以线虫 COI基因通用引物 NTF、NTR扩增内蒙古不同地区的斯氏
副柔线虫线粒体 DNA COI 基因。将扩增产物纯化后克隆并测序。经 和
分析,结果表明:扩增出的 COI 基因序列均为 689bp,不同地区样本间的
COI 基因无差异;斯氏副柔线虫 COI 基因与旋尾目(Spirurata)中旋尾科
(Spiruridae)、柔线科(Habronematidae)和吸吮科(Thelaziidae),丝虫目
(Filariata)盘尾科(Onchocercidae)某些线虫的同源性为 %~%,遗传
距离为 ~。基于 COI基因构建的系统发育树表明,副柔属归于柔线科更
符合生物进化的规律。
以 COI基因设计并合成特异性引物 STF、STR,利用 PCR方法对斯氏副柔线虫基
因组进行特异性扩增后可得到约 600bp的条带。敏感性试验表明,含有 10个虫卵的
DNA模板即可通过 PCR扩增出来;特异性试验表明,该对引物具有较好的种特异性。
本研究首次报道了斯氏副柔线虫 COI基因序列,为斯氏副柔线虫提供了一个可
靠的遗传标记,为建立斯氏副柔线虫病分子生物学生前诊断方法奠定了重要基础。
关键词:双峰驼;西方角蝇;截脉角蝇;斯氏副柔线虫;COI基因;序列分析
Observations of Parabronema skrjabini in Horn Flies and
Analysis of Its Specific Sequences within COI gene
Abstract
Parabronema skrjabini is a nematode parasite in camels’abmasum and its vectors are
Haematobia irritans and Haematobia titillans. In order to ensure the infection,
classification and establish an antemortem diagnosis method, the paper do the research
about three parts: survey the infection rate, analyse sequences of COI gene within
mtDNA, design specific primers. The results as follows:
176 horn flies (64 and 112 ) from Wulatehouqi of Bayannaoer
city in Inner Mongolia of China were dissected,