实验八：微生物大小及数量测定.doc

实验八：微生物大小及数量测定,微生物大小及数量的测定,微生物大小数量的测定,微生物大小和数量的测定,微生物细胞大小和数量的测定,微生物大小与数量的测定,微生物细胞大小和数量测定实验报告,酵母菌一般多大,细菌大小和微生物数量的测定,微生物数量的测定实验目的
1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法;
2、掌握对不同形态细菌大小测定的分类学基本要求,增强对微生物细胞大小的感性认识;
3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。
二、实验原理
1、微生物大小的测定
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一。微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺,两者配合使用。
镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺,其尺度总长为1mm,精确分为10个大格,每个大格又分为10个小格,共100个小格,每个小格10μm。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小,而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。
目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片,其中央有精确的等分刻度,一般有等分为50小格和100小格两种。测量时,需将其放在接目镜中的隔板上,用以测量经显微镜放大后的细胞物像。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同,目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
因此,用目镜测微尺测量微生物大小时,必须先用镜台测微尺进行校正,以求该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数,即可计算出细胞实际大小。
2、显微直接计数法
将小量待测样品悬浮液置于计菌器上,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如酵母、细菌、霉菌孢子等。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板或Hawksley计数板。三种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台,被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区。计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格。计数区由400个小方格组成。每个大方格边长为1mm,其面积为lmm2,盖上盖玻片后,,。使用血球计数板计数时,通常测定五个中方格的微生物数量,求其平均值,再乘以25或16,就得到一个大方格的总菌数,然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。设5个中方格中的总菌数为A,菌液稀释倍数B,则:
1mL菌液中的总菌数= ×25×104×B=5×104×A·B (25个中格)
= ×16×104×B=×104×A·B(16个中格)
溶液试剂
菌种:酿酒酵母、枯草芽孢杆菌;
溶液试剂:%吕氏碱性美蓝染液,蒸馏水;
仪器及其他用品:目镜测微尺、镜台测微尺、普通光学显微镜、擦镜纸、血细胞计数板、移液器、锥形瓶、双层瓶(含二甲苯、香柏油)等。
实验内容
1、微生物大小的测定
(1)目镜测微尺的安装
把一侧目镜的上透镜旋开,将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上,使有刻度的一面朝下。旋上目镜透镜,再将目镜插入镜筒内。
(2)校正目镜测微尺
将镜台测微尺放在显微