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试验八：微生物大小及数量测定
试验目标
1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小方法；
2、掌握对不一样形态细菌大小测定分类学基础要求，增强对微生物细胞大小感性认识；
3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量方法。
二、试验原理
1、 微生物大小测定
微生物细胞大小是微生物基础形态特征，也是分类判定依据之一。微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺，二者配合使用。
镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固标准刻尺，其尺度总长为1mm，正确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每个小格10μm。镜台测微尺并不直接用来测量细胞大小，而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。
目镜测微尺是一块可放入接目镜内圆形小玻片，其中央有正确等分刻度，通常有等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中隔板上，用以测量经显微镜放大后细胞物像。因为不一样显微镜或不一样目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格在不一样条件下所代表实际长度也不一样。
所以，用目镜测微尺测量微生物大小时，必需先用镜台测微尺进行校正，以求该显微镜在一定放大倍数目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表相对长度。然后依据微生物细胞相当于目镜测微尺格数，即可计算出细胞实际大小。
2、显微直接计数法
将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数一个简便、快速、直观方法。
显微计数法适适用于多种含单细胞菌体纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。菌体较大酵母菌或霉菌孢子可采取血球计数板，通常细菌则采取彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。三种计数板原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，能够使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部细菌不易看清。
血球计数板是一块特制厚型载玻片，载玻片上有4条槽而组成3个平台。中间较宽平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。计数区刻度有两种：一个是计数区（大方格）分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一个是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。计数区由400个小方格组成。每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻片后，，。使用血球计数板计数时，通常测定五个中方格微生物数量，求其平均值，再乘以25或16，就得到一个大方格总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物数量。设5个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数B，则：
1mL菌液中总菌数= ×25×104×B=5×104×A·B （25个中格）
= ×16×104×B=×104×A·B（16个中格）
溶液试剂
菌种：酿酒酵母、枯草芽孢杆菌；
溶液试剂：%吕氏碱性美蓝染液，蒸馏水；
仪器及其它用具：目镜测微尺、镜台测微尺、一般光学显微镜、擦镜纸、血细胞计数板、移液器、锥形瓶、双层瓶（含二甲苯、香柏油）等。
试验内容
1、微生物大小测定
（1）目镜测微尺安装
把一侧目镜上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜隔板上，使有刻度一面朝下。旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。
（2）校正目镜测微尺
将