红枣烂果病.doc

新疆红枣烂果病病原鉴定实验设计方案
摘要:新疆红枣烂果病在新疆大规模发生,尤其是南疆个别地区,塔里木盆地周边烂果病的发生更加常见。给农民带来了严重的经济损失。所以我们要鉴定它的病原来防制烂果病的大发生。红枣烂果病的病原鉴别试验分为两哥方面:采样,田间调查和病原鉴定。
关键词:新疆红枣病害病原分离法真菌细菌
一采样,田间调查
采样:南疆塔里木盆地周边枣园。
田间调查:经调查红枣烂果病是普遍发生的病害,在红枣,酸枣和沙枣上都有发生;是侵染性病害,有明显发病中心。
病因学主要是研究病害发生的原因。植物侵染性病害发生的原因是由病原物,寄主植物和环境条件三方面因素决定的,即所谓病害三角。病害是否发生和发生的轻重,决定于上述三方面的因素。
一分离前的准备工作

分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台(超净工作台)上进行,无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘,并用药物或紫外线照射消毒(常用消毒药物为70%酒精,2%煤酚皂液,5%石炭酸液等喷雾。若用紫外线灯照射则需20-30分钟)。在没有上述设备条件时,在清洁房间里关闭门窗,避免空气流动,经过喷雾除去空气及地面灰尘后进行操作,也可获得较好的结果。工作前擦净桌面,最好铺上湿纱布。将所需用的物品按次序放在工作台上,避免工作时走动,工作人员最好穿上灭菌后的工作服,带上口罩,并用肥皂洗手,用70%%新洁尔灭擦手。

凡是和分离材料接触的器皿(刀、剪、镊、针等)都要随时(至少在使用时)保持无菌,将这些用具浸于70%酒精中,使用时在灯焰上灭菌烧去酒精,如此2-3次(刀、剪、镊等不宜在灯焰上烧时过长,以防退火)。再次使用时必须重复灭菌。培养皿、试验等要经过干热灭菌。培养基及洗涤或稀释用蒸馏水都需要事先经过高压蒸气灭菌。

用新发病的植株、器官或组织做为分离材料,可以减少腐生菌的污染。任何植物坏死部分的内部或表面,都可能有腐生微生物的孽生,所以一般斑点病害应从邻近健全组织,即从病、健组织交界处获得分离材料。
二病原鉴定
红枣烂果病的病原有可能是真菌,细菌,真菌+细菌或者是专性寄生菌,因此我们要分别针对它们进行实验设计。实验主要包括:病原分离,纯化,致病性测定和病原鉴定。
细菌
植物病原细菌一般都是用稀释分离法。病原细菌在组织中的数量很大,稀释培养可以使病原细菌与杂菌分开,形成分散的菌落,容易分离得到纯培养。组织分离法对病原细菌是不适用的,原因是它不能使病原细菌与杂菌分开,杂菌生长快,会抑制病原细菌的生长。稀释分离有以下两种方法。
1 培养皿稀释分离法
取灭菌的培养皿3个,,切取约4mm见方的小块病组织,经过表面消毒和灭菌水洗过3次以后,移在第一个培养皿的水滴中。用灭菌的玻棒将病组织研碎,静置10~15min,使组织中的细菌流入水中(配成悬浮液),然后用灭菌的移植环从第一个培养皿中移植3环到第二个培养皿中,充分混合后再移植3环到第三个培养皿中。然后,将溶化的琼胶培养基冷却到45℃左右,倒在三个培养皿中。冷却凝固后,将培养皿翻转,在适温下培养。培养皿用记号笔注明分离材料、日期和稀释编号。
细菌悬浮液的配法有时影响分离的效果。一般植物病原细菌,用灭菌水稀释是适宜的。有时改用灭菌的生理食盐水(0.