PEG介导的细胞融合.doc

摘要:细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的现象,也称细胞杂交,可通过自发或人工诱导实现。本实验中主要是以小鼠的脾脏淋巴细胞为融合实验材料,通过化学方法(聚乙二醇PEG)来最终使细胞达融合,主要目的是为了探究不同浓度的PEG与细胞融合率的关系。将小鼠脾脏取出制成脾脏淋巴细胞悬液后,分别取1毫升分装到A、B、C、D、E五根离心管中,,实验中设置了20%、35%、50%、65%、80%五个PEG浓度梯度,经处理之后制成玻片在高倍显微镜下观察,对视野中细胞总数和融合细胞对数进行计数,就算融合率,最终得出结果。结果表明:在一定浓度范围内(20%-70%),细胞的融合率与PEG的浓度成正比关系;当浓度过大时,细胞融合率反而会有降低。
关键词:细胞融合;PEG;融合率;不同浓度
前言:人工诱导的细胞融合,在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合,也能产生种间细胞的融合,因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体;来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体。细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体,单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等优点。因此,融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
材料与方法
:小鼠脾脏细胞
:10ml离心管、吸管、载玻片、盖玻片、离心机、恒温水浴锅、显微镜、解剖剪刀、镊子、培养皿、漏斗、尼龙布、1ml注射器、6#针头。
:PEG、D-Hanks液、蒸馏水、%NH4Cl。

脾脏淋巴细胞悬液的制备:
(1)将小鼠脱颈椎致死;
(2)用灭过菌的剪刀在小鼠脊柱两侧剪开肌肉,见肾脏后,用镊子取出肾脏,置于培养皿中并用D-Hanks液洗涤一次;
(3)用镊子将脾脏置于尼龙布上,将尼龙布置于培养皿的盖子中,用注射器推棒轻轻挤压组织,使细胞分散。
(4)研磨后将尼龙布置于玻璃漏斗中,将漏斗插入离心管中。用D-Hanks液冲洗尼龙布上的组织匀浆,直至从漏斗肿瘤下的冲洗液不浑浊,收集细胞悬液于离心管中。2000rpm离心5min,弃上清液。
(5)%NH4Cl溶液,低渗溶解红细胞。用吸管轻轻吹打,把沉淀物打散。低渗持续一分钟,随即加入D-Hanks液至10ml,恢复至等渗。
(6) 2000rpm离心5min,沉淀物即为脾脏淋巴细胞。
(7)加5ml D-Hanks液制成细胞悬液。
配置细胞融合剂
分别取适量PEG,与蒸馏水混合,分别配成浓度为20%、35%、50%、65%、80%的PEG溶液。
细胞融合
(1)取五根离心管,编号为A、B、C、D、E,分别加入1ml脾脏淋巴细胞悬液,然后放入离心机中,1000rpm离心5min,弃上清液,,用手指轻弹离心管底部,使细胞松动。
(2)将离心管