BPG-层析柱标准装柱流程规范.docx

操作标准
目的:为了使BPG300层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好的柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA process系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员
标准操作程序:
1 基本术语概念
填料因子(Packing Factor, PF):指在在装柱过程中,用低流速(如60cm/h)对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度(柱高)的比值,
GEHC生产的各种常见填料的PF参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA》;
线性流速(linear flow rate):单位时间内液体流经的直线距离,常用cm/h表示;
体积流速(volume flow rate):单位时间内液体流经的空间容积,常用ml/min表示;
换算:
2 准备工作
检查层析柱的完整性,所带配件,是否水平(用水平仪矫正),是否清洁(如有污染应进行清洗)。
确定所用填料及其特性、浓度等
以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例,其填料因子(PF),新填料(slurry)浓度为75%(保存于20%乙醇中),耐压3bar。
确定放大后的工艺参数
以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例,
中试工艺参数:
柱高h=10cm;体积流速v1=3ml/min;柱内径d=.
即,线性流速v2=v1/s柱=3/(×) cm/min= cm/min;
样品与填料接触时间t=h/v2=10/=;
在工艺的线性放大中h、v2和t均不变,则可保证样品出峰的位置(洗脱时间)和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数:
装柱体积V柱= S柱h=××1L=7L;
装柱需要slurry体积Vslurry=V柱×PF/Cslurry
以DEAE Sepharose Fast Flow为填料,
则,Vslurry=7×=;
装入柱中的slurry高度Lslurry=Vslurry/S柱=/(×)dm==.
3管路安装
层析柱管道和配件安装
,旋松密封调节器,用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈;
用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝,并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处,在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀,在柱底安装四路二
通阀;
,另一端连至ÄKTA process上端连接口COLUMN TOP,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process的下端连接口COLUMN BOTTOM。
图1、BPG300层析柱安装示意图

ÄKTA process进样泵的A1和B1进口,两管另一端均放入纯水中;
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