BPG层析柱标准装柱流程规范.doc

BPG层析柱标准装柱流程规范.doc:..操作标准冃的:为了使BPG300层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好的柱效,故建立此操作规范。范围:配合AKTAprocess系统进行有效的蛋白质纯化操作。责任人:层析工序操作人员标准操作程序:1基本术语概念填料因子(PackingFactor,PF):指在在装柱过程中,用低流速(如60cm/h)对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度(柱高)的比值,GEHC生产的各种常见填料的PF参见《GEHCAxiChrom300-1000columnsUserManual28-9562-89EditionAA》;packingfactorPF=(consolidatedbedheight}/(packedbedheight}(CF)pressionfactorCF=(gravitysettledtedheight)/(packedbedheight),™,forexample,(linearflowrate):,常用cm/h表示;体积流速(volumeflowrate):革位时间内液体流经的空间容釈,常用ml/min表示;换算:ml 钱性JiSJ®体和流速= ,所带配件,是否水平(用水平仪矫正),是否清洁(如有污染应进行淸洗)。、浓度等以DEAESepharoseFastFlow填料为例,其填料因子(PF),新填料(slurry)浓度为75%(保存于20%乙醇屮),耐压3bar。,屮试工艺参数:柱高h=10cm;体积流速vl=3ml/min;柱内径d=,线性流速v2=vl/s柱=3/()cm/min=;样品与填料接触时间t=h/v2=10/=;在工艺的线性放大中h、v2和t均不变,则可保证样品出峰的位置(洗脱吋间)和形状不变。使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数:装柱体积V林=Stth==7L;装柱需要slurry体积Vslurry=V柱xPF/Cslurry以DEAESepharoseFastFlow为填料,则,VslurTy==;装入柱中的slurry高度LS|Urry=Vsiurry/S /()dm==,旋松密封调节器,用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈;,并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处,在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀,在柱底安装四路二通阀;,另一端连至AKTAprocess上端连接口COLUMNTOP,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至AKTAprocess的卜端连接口COLUMNBOTTOM。图1、BPG300层析柱安装示意图Table1Overviewerf6P6columnsPedhotgMkwrt Vdum*(I)ColumiDMmcMorColumnAreak饞•)Columntem)MinMax1Kickingwith•Mtonsion9>innihgwithextenttor1MmMom1RxtdngWtllextension1Kunninqwithoxtent^<bargfTotalwotghtAdaptorwokjht⑽Overalldimomionsfcm)D<W«HWO78S50026344S0020V35815748x48x12?WO7857SK4