β-榄香烯衍生物(ET) 诱导NB4 细胞凋亡的机制研究.pdf

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第 35卷第 10期 Vol 35, Issue 10

2010年 5月 May, 2010
β榄香烯衍生物( E T) 诱导 NB4 细胞
凋亡的机制研究
于志瀛
(广东食品药品职业学院, 广东广州 510520)
[摘要] 目的:于 NB4细胞株中,对β榄香烯衍生物 ET (β榄香烯 13 色氨酸)进行抗肿瘤作用研究。方法:体外细胞培
养,凋亡检测、流式细胞术和蛋白免疫印迹等技术进行机制研究。结果: ET在低于 40μmol· L - 1时可以抑制白血病细胞 NB4
生长并诱导凋亡; ET可以引起细胞内 H2 O2的蓄积并活化 caspase 3;过氧化氢酶可以阻断 ET引起的 H2 O2蓄积和凋亡。结论:
ET主要通过 H2 O2的蓄积引起细胞凋亡。
[关键词] β榄香烯衍生物;抗肿瘤;凋亡; H2 O2的蓄积; NB4 细胞
β榄香烯是从中药温莪术挥发油中分离出来的惠赠,纯度 98 9%。
油状单体,是榄香烯抗肿瘤 3种有效成分之一, 属 1 2 试剂与仪器单抗 PARP (Cell Signaling公司,
于不含氧的倍半烯烃类。β榄香烯虽然有其他抗肿批号 70282560 ) ; 单抗 caspase 3 ( Cell Signaling 公
瘤药物所不具有的优势[ 1 ] ,但因为它为脂溶性化合司,批号 70392463) ;单抗 Bcl 2 ( Santa Cruz公司,批
物,临床使用的剂型只有乳剂,稳定性较差,因此在号 07018251) ; 单抗β actin ( Santa Cruz公司,批号
临床上只能作为二线药物,极大的限制了β榄香烯 07118352) ; N 乙酰半胱氨酸(NAC, Sigma公司) ;过
的临床应用。先前的研究发现,在β榄香烯结构中氧化氢酶(CAT, Sigma公司) ; 2′, 7′二氯荧光素乙
引入亲水性基团,可以改善水溶性的同时提高抗癌二酯(DCFH DA, Sigma公司) ,丫啶橙(AO, Sigma公
活性[ 2 ] 。对β榄香烯 13位氨基酸取代衍生物的活司) ;溴化乙啶( EB , Sigma公司) 。DMLS2型徕卡正
性筛选中发现, 13位色氨酸取代β榄香烯( ET)抑置荧光显微镜(德国莱卡公司) ;流式细胞仪(Becton
制细胞生长及诱导细胞凋亡的能力明显强于母体化 D ickinson) ;M ini电泳仪(B io Rad) 。
合物β榄香烯,结构见图 1。本文对化合物 ET的凋 1 3 细胞株人类急性髓细胞性白血病细胞株
亡诱导作用机制进行了研究。 NB4由广州军区广州总医院医学实验科惠赠。细胞
接种于含有 10%胎牛血清( FBS) , 100 U · mL - 1青
- 1
霉素, 100 U · mL 链霉素, 0 2% NaHCO3的 RPM I
1640培养液中,在 37 ℃, 5% CO2饱和湿度的培养箱
内培养。
2 方法
2 1 细胞生长抑制活性测定通过改进的 MTT法
测得