分子实验报告.doc

分子生物学Ⅱ综合性实验论文BEL7402细胞MDR1基因单核苷酸多态及GAPDH蛋白表达检测姓名:徐方班级:生物制药10学号:1009501163指导教师:生物科学系分子生物学综合性实验教学小组李黄金广东药学院生命科学与生物制药学院目录1、前言2、中文摘要/Abstract3、 -5- -5--琼脂糖凝胶电泳法 -8--紫外分光光度计法 -7- 12-(SNP)的检测 -15- -18-、蛋白质含量测定 -19--聚丙烯酰胺凝胶电泳 -23- -27-4、 -5-(SNP)的检测 -15- -18-5、参考文献6、致谢前言中文摘要:本综合性实验前部分是先从Bel7402细胞中提取目标基因多药耐药基因1(MDR1),然后取部分提取样品进行琼脂糖凝胶电泳,目的是检测目的基因的分子量大小,再用紫外分光光度计检测样品NDA的浓度和纯度,之后用PCR技术扩增目的基因。再对扩增的目的基因进行单核甘酸多态性(SNP)检测,主要技术是限制性酶切片段长度多态性(RFLP),SNP用于疾病基因的定位|克隆和鉴定。后部分是从Bel7402细胞中提取细胞总蛋白,然后制作蛋白质标准曲线,测定总蛋白含量。再对蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳之后将蛋白条带转移到PVDF膜,一抗、二抗孵育后用DAB显色,目的是检测目的基因GAPDH的表达。Abstract:prehensiveexperimentpriortothefirstpartisfromBel7402cellextracttargetgenemanydrugresistancegene1(MDR1),thentakepartextractionsamplesagarosegelelectrophoresis,thepurposeistotestthepurposegenemolecularweightsize,garnishwithultravioletspectrophotometertestingsampleNDAconcentrationandpurity,(SNPS)test,themaintechnologyisrestrictionenzymefragmentlengthpolymorphism(RFLP),SNPfordiseasegenelocation|,celltotalprotein,andthenmakeproteinstandardcurve,,aresistance,tworesistanceafterincubationwithDABcolor,、材料与方法:、材料与试剂:仪器:离心机、恒温水浴箱、紫外分光光度计;石英比色皿、恒温培养箱、琼脂糖凝胶电泳系统、小型高速离心机、高压灭菌锅、微波炉、PCR仪,灭菌锅、双蒸水器、冰箱,电泳设备、紫外分析仪、移液器、枪头、一次性手套、、冰块。材料:BEL7402肝癌细胞、:百泰克基因组DNA提取试剂盒、无菌水、50×TAE(50倍体积的TAE贮存液)凝胶加样缓冲液(6×)、琼脂糖、溴化乙锭溶液(EB)µg/mL、DNA分子量标准(DNAMarker)、10×PCRBuffer;20mMdNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各20Mm;Taq酶1U/μl;灭菌双蒸水ddH2O;琼脂糖。3试剂:MboI、10×Buffer、ddH2O、琼脂糖、凝胶回收试剂盒、TAEBuffer、电泳上样缓冲液、