谷胱甘肽合成酶的克隆与工程菌筛选.pdf

�
维普资讯
赣�
������
谷胱甘肽合成酶的克隆与工程菌筛选�
魏锁成。张宪云�
�������
摘要运用分子生物学方法构建含���基因的质粒������一�一���,转化不同的宿主菌������,�����,����,�����。挑克�
隆,经重组鉴定����方法�。����诱导。检测不同菌间���表达产量差异,同时将同种菌部分进行非����诱导对照,比较表达�
量差异,旨在寻找高表达���活性菌。结果显示,质粒������一�一���重组转化�����,�����,�����,����。经����诱导�
后,���的产量在����中较高。表明����可以是���的高表达菌株。�
关■词谷胱甘肽合成酶;克隆;表达;工程菌�
中圈分类号����.��文献标识码��文章编号����—������������—����—���
��������������������������������在探寻高表达���活性菌。�
�一�· �一�⋯��‘�
���������������������������������材料和方法�
��������������������������.�材料�
菌种和质粒采用�����,�����,�����,���,变形链球�
������������,��������������菌,����������一�。主要试剂为限制性内切酶��������,�
�����,�����连接酶,���酶,异丙基一�—�一硫代半乳糖苷�
��������������������������,�����������������������
������;��培养液,����—���缓冲液,����分析液等。设备�
�������������.���������������������
采用���仪,紫外分光光度计,台式冷冻离心,凝胶成像系�
����������������������������������������������������������������统,核酸电泳设备等,�����超声破碎仪。�
����������������������������������������������������������������.�方法�
������一�一�������������������������������������, ����,��.�.�引物�
�����.�����������.�����������.�����������������������/��按���������报道的序列设计一对引物,引物由上海生工�
��������������������������������.�����������������������������生物工程技术服务有限公司合成。�
�������������������������������������������������������������.�细菌���提取�
���������������������������������������������������������������丑�取�����,�