转基因牛与非转基因牛性控精液分离及配种效果初探.doc

《中国奶牛》 2012年13期
转基因牛与非转基因牛性控精液分离及配种效果初探
吕小青1朱玉林1,*李艳华1薛建华1 杜欣悦1 王彦平1 戴云平2
(1、北京奶牛中心北京 100192 2、中国农业大学北京 100193)
摘要:本研究对转基因奶牛以及非转基因奶牛精液经流式细胞仪分离后精子活力、分离准确率进行了比较分析,同时对分离的性控精液进行了人工输精,对受体牛的情期受胎率进行了统计分析。结果表明,转基因牛与非转基因牛在冷冻解冻后活力以及分离准确率方面并无明显差异;%(转基因牛)%(非转基因牛),二者之间无显著差异(P<)。
关键词:转基因牛性控精液流式细胞仪
利用流式细胞仪分离精子的技术已经成功应用于许多哺乳动物,如牛、猪、羊、狗、马、猫等[1],其原理主要是根据X、Y 精子的DNA含量的差异对X、Y 精子进行分离。
SX-MoFlo 是由美国DaKa公司和XY公司共同设计的生产精子的专用设备,经过技术的不断改善,最明显的是陶瓷喷嘴和激光器的改进,精子分离速度从2000年的平均每秒2000个到目前每秒4500~5000个或更高[2],随着分离速率的不断提高,性控精液的品质也得以改进。性控精液通过提高母犊牛出生率,可成倍提高母牛的繁殖效率,对加速高产奶牛的繁育以及缩短奶牛世代间隔具有重要的意义,其应用前景广阔[3]。
本研究对转基因牛与非转基因牛的性控精液分离效果进行了初步分析,同时对分离性控精液的配种效果进行了统计分析,旨在探讨转基因是否影响种公牛的繁殖性能。
材料与方法
种牛来源
非转基因荷斯坦种公牛10头来源于北京奶牛中心种公牛站,转基因牛10头来源于中国农业大学培育的转基因荷斯坦公牛,目前饲养于北京市种公牛站。人工授精实验在北京奶牛中心良种场进行。
原精液
本实验所用公牛健康、性欲旺盛,用假阴道采集精液。采集后观察精液的颜色,合格鲜精的色泽为乳白色或稍带淡黄色。选择活力≥,密度≥6亿/mL的鲜精用于本实验。
、分离、冷冻及保存
采集的原精液经品质鉴定(活力、密度、色泽)后进行染色,根据精液密度加入染色用的5mg/mL的HO33342,34℃水浴锅内暗室孵育45min后,加入2mL 4% egg yolk再用50μm过滤器过滤到新的上样管上机分离。
性控精液利用流式细胞仪SX-MoFlo精子专用分离设备进行分离,按照90%以上的准确率对定向正确的X精子和Y精子设门分离,本实验中只收集X精子,Y精子和死精子废弃。
将分离收集的精子经过4℃平衡和离心,精确测定精液的体积和计算精子浓度,再经过稀释、细管包装和冷冻降温,(每管约200万个精子)投入液氮保存备用。

用流式细胞仪分离的转基因牛与非转基因性控精液, 在38°C水浴解冻15s,用手帕将解冻后的精液细管擦干,取20μl解冻的精液样品滴到预热的载玻片上,并加盖玻片37℃在相差显微镜下检测精子的活力,每个样片观察5个视野,并观察不同液层内的精子运动状态,进行全面评价,精子活力以直线运动精子占总精子数的比例来评价。X/Y分离准确率通过SX-MoFlo带有的一个专用程序进行检测,每次可取精子样本5000-10000