试验一红细胞计数试验目的掌握红细胞计数原理及技术二.doc

实验一红细胞计数一、实验目的:掌握红细胞计数原理及技术。二、实验原理:用等渗稀释液将血液稀释一定倍数,充入计数池中,于显微镜下计数一定体积内的红细胞数,经过换算示得每升血液内的红细胞数。三、实验器材及试剂:显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。四、实验操作:1、取试管1支,。2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部,再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次,立即摇匀。4、将计数池与盖玻片用软布料擦净,将盖玻片覆盖于计数池上。5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液,充入计数池中。6、静止2-3分钟,待经红细胞下沉后,用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。五、计算N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升×5:表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数×10:1个大方格容积、、换算为1ul内RBC数×106:1ul换算为1升内红细胞数×200:稀释倍数六、正常参考值正常参考值:成年男性:-×1012/升成年女性:-×1012/升新生儿:-×1012/升实验二血红蛋白测定一、实验目的:掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。二、实验原理:血液在血红蛋白转化液中溶血后,除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白,ˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋()。最大吸收峰540nm,最小吸收波谷504nm,在特定的条件下,--1,因此根据标本的吸光度,即求得血红蛋白浓度。三、实验操作:1、取指血20ul,加到5ml血红蛋白转化液中,混匀,静止5分钟。2、用分光光度计比色,波长540nm,以蒸馏水或空白转化液调零,测定吸光度。3、用血红蛋白浓度为50g/L、100g/L、150g/L、200g/,,,、计算:血红蛋白(g/L)=测定管吸光度×:成年男性:120-160g/L成年女性:110-150g/L新生儿:170-220g/L实验三白细胞计数一、实验目的:掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。二、实验原理:用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞,混匀后充入计数池中,于显微镜下计数一定体积内的白细胞数,经过换算求得每升血液内的白细胞数。三、实验器材及试剂:显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。四、实验操作:1、取试管1支,。2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。3、擦去管尖外部余血、轻轻注入稀释液底部,再吸取上清液清洗3次,摇匀。4、将计数板与盖玻片用软布擦净,将盖玻片覆盖于计数池上,再用微量吸管吸取悬液,充入计数池与盖玻片间的细缝隙中,静止2-3分钟,待白细胞下沉。5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。五、计算(四个大方格内WBC数/4)×10×20×106=WBC数/升六、正常参考值正常参考值:成人:(4-10)×109/升新生儿:(15-20)×109/升6月-2岁:(11-12)×109/升实验四白细胞分类计数一、实验目的:掌握白细胞分类计数、原理