链霉菌实验操作资料.doc

链霉菌实验操作资料.doc链霉菌菌种保藏录入时间:2009-8-2814:22:18来源:食品科技网   链霉菌菌种(非bld菌株)都是采用低温甘油保藏,即从长满链霉菌孢子的固体平板上用无菌棉签刮下孢子,直接悬浮于装有一定量体积20%甘油的菌种管中并剧烈振荡分散后,于-20℃保存｡  bld菌株将液体培养基YEME(%或34%蔗糖)摇36-48小时后的菌丝体,离心,%的蔗糖洗涤3次后,直接-20℃保存｡检测链霉菌淀粉酶的活性将在MS培养基上生长2天后的菌苔用tip头尾部打上眼,然后接种到淀粉酶检测培养基上｡生长5天｡用碘液显色｡非常简单｡培养基:水1升,可溶性淀粉20克,青岛琼脂20克,蛋白胨5克,NaCl5克,吹干碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml,先将KI溶于少量水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,加热助溶,加蒸馏水定容｡上一篇:微生物检查中的MPN法和CFU法下一篇:链霉菌实验操作1链霉菌实验操作1录入时间:2009-8-2816:09:31来源:食品科技网一､培养基､抗生素､生长因子常用抗生素及其使用浓度抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml)使用终浓度(μg/ml)链霉菌大肠杆菌MM2CMYEMELA或LB氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素Ampicillin,Amp         Chloramphenicol,CmlHygromycin,HygKanamycin,KmSpectinomycin,SpcStreptomycin,StrThiostrepton,ThioErythomycin,EryApramycin,Amblacathygaac或aphaadAstrtsrermEaac(3)IV10025(无水乙醇配)5025505025(DMSO配)10050R10102?5010510010R-2550502510-50R---50--5050-1002550505025不敏感2030-50*–表示无记录或不能使用,贮存液除特别说明外均用无菌水配制*此表仅供参考!!!*R表示不敏感*Km和Am有交叉抗性,所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量,并作好对照｡*Hyg易见光分解,应用锡箔纸包好｡*有些抗生素需要在低盐的环境(如DNA培养基)下筛选效率较高,如Hyg,Km,Vio LB(Luria-Bertani)培养基胰蛋白胨10g,酵母抽提物5g,NaCl5g,葡萄糖1g,蒸馏水加至1000ml,(灭菌后第一次用时还要调一次) -2%的琼脂粉(不同的琼脂加的量不同,%,而华美的需要2%)｡*做蓝白斑筛选时不加葡萄糖基本培养基(MM)溶液:L-,K2HPO4 ,MgSO4·7H2O ,FeSO4·7H2O ,,灭菌,使用时每瓶加入50%葡萄糖(8磅灭菌)5ml,｡配置MM的琼脂有labagar､Iceagar(IA) R5(1L)链霉菌原生质体转化时用  蔗糖                                    103g  K2SO4                                                     MgCl2·6H2O                              葡萄糖                                  10g  Difco酪蛋白氨基酸                         微量元素溶液                            2ml  Oxoid酵母提取物                         5g  TES                                       加蒸馏水至                              ,倒入250ml上述溶液,然后塞上塞子后8磅灭菌(114度15分种)｡使用时,将培养基融化,每瓶中加入:  KH2PO4(%)                               CaCl2·2H2O(5M)                          1ml  L-脯氨酸(20%)                              NaOH(1M)                     对营养缺陷型菌株加入适当