链霉菌实验操作资料.doc

链霉菌菌种保藏录入时间:2009-8-28 14:22:18 来源:食品科技网链霉菌菌种(非 bld 菌株)都是采用低温甘油保藏,即从长满链霉菌孢子的固体平板上用无菌棉签刮下孢子,直接悬浮于装有一定量体积 20% 甘油的菌种管中并剧烈振荡分散后,于-20 ℃保存。 bld 菌株将液体培养基 YEME (含 % 或 34% 蔗糖)摇 36-48 小时后的菌丝体,离心, % 的蔗糖洗涤 3次后,直接-20 ℃保存。检测链霉菌淀粉酶的活性将在 MS培养基上生长 2天后的菌苔用 tip 头尾部打上眼,然后接种到淀粉酶检测培养基上。生长 5天。用碘液显色。非常简单。培养基: 水1升,可溶性淀粉 20克,青岛琼脂 20克, 蛋白胨5克, NaCl 5克,吹干碘液:碘 1g,碘化钾 2g,蒸馏水 300ml ,先将 KI溶于少量水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,加热助溶, 加蒸馏水定容。上一篇: 微生物检查中的 MPN 法和 CFU 法下一篇: 链霉菌实验操作 1 链霉菌实验操作 1 录入时间:2009-8-28 16:09:31 来源:食品科技网一、培养基、抗生素、生长因子常用抗生素及其使用浓度抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml) 使用终浓度( μ g/ml ) 链霉菌大肠杆菌 MM 2CM YEME LA或 LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素 Ampicillin, Amp Chloram phenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am bla cat hyg aac 或 aph aadA str tsr erm E aac(3)IV 100 25( 无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO 配) 100 50 R 10 10 2? 50 10 5 100 10 R- 25 50 50 25 10 - 50 R--- 50 - - 50 50-100 25 50 50 50 25 不敏感 20 30-50 *–表示无记录或不能使用,贮存液除特别说明外均用无菌水配制* 此表仅供参考!!! *R 表示不敏感*Km 和 Am 有交叉抗性,所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量,并作好对照。*Hyg 易见光分解,应用锡箔纸包好。* 有些抗生素需要在低盐的环境(如 DNA 培养基)下筛选效率较高,如 Hyg, Km, Vio LB( Luria-Bertani )培养基胰蛋白胨 10g , 酵母抽提物 5g, NaCl 5g ,葡萄糖 1g, 蒸馏水加至 1000ml , 左右(灭菌后第一次用时还要调一次) LA LB 中加入终浓度为 -2% 的琼脂粉( 不同的琼脂加的量不同,如青岛琼脂大概需 % ,而华美的需要 2%) 。*做蓝白斑筛选时不加葡萄糖基本培养基( MM) 溶液: L- 天冬酰胺 , K2HPO4 , MgSO4 · 7H2O , FeSO4 · 7H2O , 蒸馏水至 1000ml 将每 250ml 溶液分装到装有 琼脂的 500ml 三角瓶中, 灭菌, 使用时每瓶加入 50 %葡萄糖(8 磅灭菌) 5ml ,调 。配置 MM 的琼脂有 lab agar 、 Ice agar(IA) R5( 1L )链霉菌原生质体转化时用蔗糖 103g K2SO4 MgCl2 · 6H2O 葡萄糖 10g Difco 酪蛋白氨基酸 微量元素溶液 2ml Oxoid 酵母提取物 5g TES 加蒸馏水至 1000ml 称取 Difco 琼脂放入 500ml 三角瓶中, 倒入 250ml 上述溶液, 然后塞上塞子后 8 磅灭菌( 114 度 15 分种)。使用时,将培养基融化,每瓶中加入: KH2PO4(%) CaCl2 · 2H2O(5M) 1ml L- 脯氨酸(20%) NaOH(1M) 调 pH至 对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子(请参考《手册》) YEME( 酵母膏- 麦芽膏培养基) 1L (液体培养链霉菌) Oxoid 酵母提取物 3g Oxoid 蛋白胨 Tryptone 5g 麦芽提取物( BD 公司原 Difco 公司 218630 ) 3g 葡萄糖 10g 蔗糖* 340g 蒸馏水至 1000ml 高压灭菌后加入:( 8 磅灭菌, 113 - 1