乳铁蛋白综述.pdf

摘要乳铁蛋白是转铁蛋白家族的一员,一种可以结合铁的糖蛋白,分子量在80kDa左右,是近期研究较热门的蛋白之一。乳铁蛋白分子由一条肽链进行了折叠后形成两个对称的叶(N叶和C叶),两叶上都有铁结合位点。缺铁的乳铁蛋白和铁饱和的乳铁蛋白之间的构型有变化,可以相互转换。乳中的乳铁蛋白在脱脂和去酪蛋白后,可以用色谱、超滤、盐析等方法分离纯化,电泳法、HPLC、ELISA等方法可以用来检测乳铁蛋白的含量。关键词:乳铁蛋白铁结合折叠纯化检测AbstractLactoferrinisan80kDairon-(NandClobes)。+.LFfromthemilkcanbeseparatedandpurifiedbychromatography,,HPLC,:lactoferriniron-bindingfoldpurificationmeasurement乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是近期研究比较热门的蛋白,具有转运铁的功能,能够促进人体铁的蛋白。,在牛奶中被发现,被称为红蛋白。乳铁蛋白是铁传递蛋白(transferrin)家族中的一员,是具有结合铁功能的糖蛋白。转铁蛋白还包括血清转铁蛋白(serumtransferrin)、卵转铁蛋白(ovotransferrin)、黑素转铁蛋白(melanotransferrin)和碳酸酐酶抑制剂(theinhibitorofcarbonicanhydrase)[1]。这种糖蛋白还在粘膜分泌物中发现,如眼泪、唾液、阴道分泌物、精液、鼻和支气管分泌物、胆汁、胃和肠分泌物、尿液,其中常乳和初乳中的含量最高[2]。牛奶中的乳铁蛋白是由腺上皮细胞合成的。人乳和牛乳中乳铁蛋白含量随着哺乳期的延长而减少,但牛乳在非哺乳期LF保持较高的含量[3]。奶酪乳清中的乳铁蛋白浓度大约是100mg/L。初乳常乳人乳6~14mg/~~5mg/~[3],内含(铁结合部位),铁半饱和到饱和的乳铁蛋白成红色,在475nm处有特殊的吸收峰。(一)铁结合乳铁蛋白结合Fe3+是可逆的,根据结合Fe3+的多寡,可将乳铁蛋白分为缺铁型乳铁蛋白(apo-LF)、铁半饱和型和铁饱和型(holo-LF)。抗巴氏杀菌变性能力依次为:holo-LF>铁半饱和型>apo-LF。天然状态的乳铁蛋白是部分饱和的。3+2--乳铁蛋白结合Fe的能力依赖于CO3或者HCO3,而与柠檬酸盐的浓度呈负关系[4]。(二)等电点乳铁蛋白是碱性蛋白,表面具有多个带正电碱性区域。±,-[4]。(三)热稳定性乳铁蛋白在碱性条件和中性条件下,容易失活。,65~69℃时就发生失活。酸性条件下脱铁LF(apo-LF)非常稳定,、90℃处理5min,其铁结合能力、抗原活性以及抗菌活性与未处理前相同;在65~95℃的范围内,LF的热变性程度随温度升高而逐渐增加。另外人们发现,LF的热稳定性随铁饱和度的增加而增加,而且含铁LF的两叶(lobes)也具有不同的热稳定性。这可能是由于含铁LF的结构更紧密因而更难以失活。此外,~,100~200℃处理5min时明显发生降解,而其抗菌活性却有所增强。这表明降解以后的小分子仍具有抗菌活性,LF的活性部位是很稳定的,能耐受酸性降解[5]。牛乳铁蛋白的热稳定性取决于环境因素,如pH、盐和乳清蛋白。牛奶中的apo-bLF和holo-bLF比在磷酸缓冲液中对热更敏感。而在磷酸缓冲液中,apo-bLF比holo-bLF变性得更快[6]。图1:(一)氨基酸序列现在确定的乳铁蛋白氨基酸序列,包括了从人、鼠、牛、马、猪、山羊、绵羊、水牛和骆驼中得出的数据。一个乳铁蛋白分子含有大约690个氨基酸残基[7]