过氧化氢酶活力测定CAT.doc

过氧化氢酶活力测定碘量法目的意义过氧化氢酶(Catalase,CAT)普遍存在于植物所有组织中,其活性与植物的代谢强度、抗衰老、抗寒、抗病能力有一定关系,在生产实践中常进行测定。学习几种测定CAT活性的方法,理解其测定原理。一、实验原理过氧化氢酶能把过氧化氢分解为水和氧,其活性大小,可以一定时间内分解的过氧化氢量或生成氧气的量来表示。H202的测定常采用氧化还原滴定法,碘量法是其经典方法。其原理是在有催化剂钼酸铵存在时,过氧化氢与碘化钾反应,放出游离碘,再用硫代硫酸钠滴定碘,以淀粉指示剂指示滴定终点。根据空白和测定二者滴定值之差,即可算出酶分解的过氧化氢量。其反应为:H2O2十2KI十H2S04→I2十K2S04十2H20I2+2Na2S2O3→2NaI+NaS406二、材料、。、研钵、100ml容量瓶、50ml酸滴定管、移液管(1、5、10ml)、100ml三角瓶。(1)碳酸钙粉末(2),加入约500ml蒸馏水,边搅拌边加入100ml浓硫酸,冷却后用量瓶定容到1000ml。(3)10%的钼酸铵溶液:称取钼酸10g,溶于蒸馏水中使成100ml。(4)1%淀粉溶液:取1g可溶性淀粉于小烧杯中加约20ml水调匀,慢慢倾入约80m1沸水中,在搅拌下加热至重新沸腾冷却后贮于滴瓶中(可加少量HgCl2防腐)。(5)·5H2O25g,溶于新沸腾并冷却过的蒸馏水中,,,并稀释至1升,保存于棕色试剂瓶中,放置暗处。一天后进行标定。标定方法:,加30ml蒸馏水溶解,加入2gKI和5ml6mol/L盐酸,在暗处放置5min,然后用水稀释至200ml,,当溶液由棕红色变为浅黄色时,加入1ml淀粉溶液,继续滴至溶液由蓝色变为亮绿色(Cr3+离子的颜色)为止。计算出Na2S203的浓度()。(6),,加入100ml量瓶中,加水定容,摇匀即成,用时现配。(7),取1ml30%的过氧化氢用水稀释至150ml,。三、,,仔细研磨成匀浆,移入100mL量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,振荡片刻,静置。取上清液10ml移人100ml量瓶加蒸馏水稀释至刻度(稀释1