MS营养液配置方法.doc

孢子的采集收集用于播种的孢子必须是成熟的孢子,采集孢子的最佳时期是孢子裹盖逐渐变褐、变黑,边缘开始翻卷时,一般采集中、下部的孢子。采集时摘下有成熟孢子的叶,将其放在白色的塑料袋中保存在温暖干燥的环境下,5-7d就会有孢子在孢子裹破裂后弹出。注意采集时,勿混杂其他蕨类植物孢子,保持叶片干净。采集孢子后可用信封或干净纸袋进行收集,并编上号,注明种类、采集地点、采集人、采集日期等。放于4℃的冰箱中保存。培养基的配制MS培养液配方及配制方法大量元素(母液Ⅰ)mg/LNH4NO333000KNO338000CaCl2·2H2O8800MgSO4·7H2O7400KH2PO43400微量元素(母液Ⅱ)KI166 H3BO31240 MnSO4·4H2O4460 ZnSO4·7H2O1720 Na2MoO4·2H2O50 CuSO4·5H2O5CoCl2·(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O5560 Na2-EDTA·(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20000IVB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6)100 盐酸硫胺素(维生素B1)100 甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1L。母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5·5,最后定容到1L,保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。2,4-D、NAA、6-BA等植物生长调节物质母液,配置方法:分别称取这3中物质各10mg,将2,4-D和NAA用少量(1ml)无水乙醇预溶,将6-BA用少量(1ml),溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100ml,。配制MS培养基时,取母液Ⅰ50ML,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA、ⅣB各5ML,再取2,4-D5ml,NAA1ml,琼脂粉20g,蔗糖50g溶解于1000ML烧杯中,加热溶解配制成MS培养基。优化:培养基中可加入4mg/l的雷多米尔溶液按雷多米尔溶液:培养基=1:10的比例添加。灭菌:将培养基分装到培养瓶中(每瓶约50ML),培养基经121℃高压灭菌10min,取出,冷却,待用~!灭菌前可加适量蕨类提取物,如黄酮,槲皮素等,可大大增加孢子萌发率。孢子的灭菌及接种设备的灭菌取漏斗,放如滤纸,用超纯水润湿。将孢子置于其中,加入适量千分之一的HgCl2溶液杀菌,重复2—3次后,用超纯水润洗3—4遍。将杀菌后的孢子用无菌水冲到离心管中,震荡后待用。接种用的各种设备也需经过以上相同步骤灭菌。接种先打开超净工作台的紫外线灯,风速跳到最大。杀菌20min后,关闭紫外灯,点燃酒精灯,用杀过菌的吸管,吸取适量孢子悬浮液在酒精灯下加入培养瓶中。、光照及其他因素温度25℃,光照1000lx,湿度9