环状沉淀实验报告.docx

环状沉淀实验报告实验三沉淀反应可溶性抗原如血清,毒素、细菌浸出液等和相应抗体相遇,当二者比例适当,并有电解质参与时,形成肉眼可见的沉淀物,称为沉淀反应(precipitation)。参与沉淀反应的抗原称为沉淀原,抗体称为沉淀素。由于沉淀原多为可溶性物质,单位体积内所含的抗原量较多,与抗体结合的总面积大,为求得抗原与抗体的适当比例,操作时稀释抗原而不是稀释抗体,一般以出现沉淀现象的抗原最高稀释度作为沉淀反应效价。沉淀反应是临床上常用的血清学试验之一。它的种类很多,有环状沉淀、琼脂扩散、免疫电泳等。利用可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内进行扩散,当抗原与抗体相对应,二者比例适合时,就出现白色沉淀物。本试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂内进行操作。琼脂扩散试验可分为单向琼脂扩散试验与双向琼脂扩散试验等。一、单向琼脂扩散试验【原理】是单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)试验中的一种定量试验。将一定量的抗体混合于琼脂内,倾注于玻璃板上,凝固后,在琼脂层中打孔,再将抗原加入孔中。孔中抗原向四周扩散,在抗原与抗体比例合适处,呈现白色沉淀环。沉淀环的直径大小与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线,则未知标本中的抗原含量可从标准曲线中求出。本试验主要用于检测血清中IgG、IgM、IgA和补体C3等的含量。【材料】 1.%盐水琼脂(生理盐水配制,琼脂含量%)。 。 。 ,系冻干正常人混合血清。 、微量加液器、打孔器(直径3mm)、注射针头、两脚规、直尺、半对数坐标纸等。【方法】 %琼脂在56℃水浴中混匀,每块载玻片浇注3ml,制成免疫琼脂板。 ,孔间距为~,挑出孔内琼脂。 ,待完全溶解后,用~倍比稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160等5种浓度。 ,准确地加到琼脂板的各孔中,每种浓度加2个孔,用以制作标准曲线。测待检血清时,血清用PBS作1∶40稀释,每孔加10μl,每份标本加2个孔。 ,经37℃24h后取出,测各孔沉淀环直径(图1-1)。【结果】 ,即可见清晰的乳白色沉淀环。 ,相应孔中IgG含量为纵坐标,在半对数纸上画出标准曲线。根据待检血清沉淀环的直径,查标准曲线,将查得的IgG含量乘以标本的稀释倍数,即为血清中IgG含量(图1-2)。图1-1单向琼脂扩散试验示意图【注意事项】 。温度过高会破坏抗体活性;温度低于42℃则琼脂很快凝固,不能制板。 ,以免出现误差。 3 .沉淀环的直径以毫米为单位测量。沉淀环直径图1-2单向扩散标准曲线示意图一、ABO血型的测定将含有抗原的透明浸出液重叠于含有抗体的免疫血清上,在两液交界处发生环状的白色沉淀物,即称为环状沉淀反应。炭疽环状沉淀反应又称为阿斯可里氏反应。具体操作方法如图实9-1所示。沉淀原的制备 ~3g,在乳钵内研碎,然后加5~10倍生理盐水