《医学细胞生物学》细胞融合 设计型实验设计报告.doc

医学细胞生物学设计性实验设计报告姓名余囯清班级2011级k―3学号05评分实验项目:动物细胞融合、细胞核的分离与鉴定实验原理:细胞融合又称细胞杂交,他是指细胞彼此接触时,两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的现象。在自然情况下,体内或体外培养细胞间所发生的融合,称为自然融合。而在体外用人工方法(使用融合诱导因子)促使相同或不同细胞间发生融合,称为人工诱导融合。人工诱导融合中常用的诱导因子有:生物的(如灭活的仙台病毒)﹑化学的(如聚乙二醇)和物理的(如电融合)因子。聚乙二醇是一种去垢剂,易得,用法简单﹑融合效果稳定,是目前运用的比较多的一种诱导剂。细胞融合的范围佷广,从种内、种间、属间、科间一直到动植物两界之间都获得了成功。目前,这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种的重要手段。实验步骤:(一)50%PEG液的制备称取一定量的PEG(MV=4000)放入试管内在酒精灯火焰上加热,使其熔化,待冷至50℃时,加入等体积并预热的无血清1640液混匀。置之37℃水浴箱种保温待用。(二)融合方法:,按常规方法消化制成细胞悬液。如果用鸡血细胞,。,以800r/min离心7~8min,倾去上清液,加入8mlHanks,再次悬浮细胞,离心洗涤一次,倾去上清液后将离心管倒置于滤纸上,尽量流尽剩余液体(这一步很重要,因为残留液体会改变PEG的浓度)。,使沉淀物松散。然后吸取制备好的50%,在37℃水浴中,于90s内逐滴加入离心管中,边加边振摇离心管,使之与细胞混匀,然后加入8~10mlHanks液轻轻吸打混匀,在37℃水浴中静置5min以稀释PEG。离心弃去上清液后,加入2~3ml含小牛血清的1640培养液,在37℃水浴中孵育30min。,取一滴融合后的细胞悬液滴片,加盖片镜检。注意事项:(1)制备的50%PEG一定要保温在于37℃水浴中,不然冷却后结晶析出。(