医学细胞生物学设计型实验设计报告.doc

医学细胞生物学设计型实验设计报告姓名:吴纲宪学号:1010150706班级:临床七班姓名:张欢学号:1010150708班级:临床七班姓名:黎声富学号:1010150709班级:临床七班姓名:梅猛学号:1010150711班级:临床七班实验项目:利用聚乙二醇(简称PEG)为介导物进行细胞融合实验原理:细胞融合(cellfusion)是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象称为细胞融合,结果产生杂交细胞(hybrid)亲本相同的融合细胞称为同核体,反之称为异核体。细胞的融合是利用了细胞膜的流动性,在外界诱导作用下(常用的有灭活的仙台病毒、PEG、电刺激等)各类细胞的膜结构发生改变,使两细胞接触点处脂膜的脂类分子发生疏散和重组,由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用,使细胞发生融合。所以本次实验利用聚乙二醇的此性质,改变蟾蜍的血细胞膜的结构,进行细胞融合。本次实验实验所用蟾蜍的血细胞,其原因有:1、蟾蜍血便宜,是单个散在性的细胞,不需要解离。2、蟾蜍血细胞具有细胞核,便于对融合细胞进行鉴定。如果经过融合的细胞经镜检观察仍然只有一个细胞核那么即为未融合,如果经过融合的细胞经镜检观察有两个或者两个以上的细胞核即为融合成功了的细胞。实验步骤:1、先将蟾蜍处死取蟾蜍血2ml和2mlAlsver液混合后,再加上6mlAlsver混匀后制悬液。(可在4℃下保存)2、取①%的NaCl溶液进行一下两次离心处理。①1200r/min离心5min(%NaCl溶液②1000-1200r/min离心5min3、将上步最后一次的沉降雪球(去上清液后,-),加入GKN液,至1-2ml使之成10%的细胞悬液)4、取上述10%的血球悬液1ml,加入3mlGKN液,使每毫升含血球15000万个,即15×107个/ml5、取步骤4中所得悬液1ml+,均匀滴片,在常温下2-3min后即可镜下观察。预期结果:在高倍镜下可以看到两个或两个以上的蟾蜍血红细胞融合在一起。教师:日期:实验仪器、设备、器具表名称规格、**,、%9ml等渗溶液GKN液NaCl8g、、Na2HPO4·、·、葡萄糖2g、~5ml模拟细胞内环境,维持溶液PH值稳定,着色细胞50%PEG液取PEG(MW4000)放入刻度离心管中,在沸水浴中加热,使其熔化,待冷至50℃时,加入预热50℃等体积的GKN液,混匀即可。:⑴、胞融合对温度的敏感很高,过高和过低的温度都会严重影响细胞融合,其温度应该控制在37℃~39℃范围内。⑵、EG有毒性,此次实验对PEG的浓度要求很高,实验时应