医学细胞生物学设计型实验.pptx

医学细胞生物学设计型实验
动物细胞融合
实验目的
1、了解动物细胞融合的常用方法。
2、学习化学融合的基本操作过程。
3、观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化。
实验用品
显微镜、水浴箱、普通离心机、高心管、载玻片、盖玻片、酒精灯、试管、量筒、电子天枰
肝素钠、Alsever液、%生理盐水、Hanks液、聚乙二醇(PEG Mr=4000) %亚甲基蓝染液
实验原理
细胞融合(cell fusion):由两个或多个细胞相互接触后,其细胞膜发生分子重排,导致细胞合并、染色体等遗传物质重组的过程称为细胞融合。分为细胞自发融合和诱导细胞融合。
诱导细胞融合( induced cell fusion)
诱导细胞融合的方法主要有用灭活的仙台病毒、聚乙二醇和电脉冲法。
细胞自发融合
指在未施加任何条件的情况下所发生的细胞融合现象。
实验步骤——10%鸡血细胞的制备
1、取鸡血细胞悬液1ml到10ml离心管,%生理盐水混匀,1000r\min离心5min,弃上清液,再按照上述条件离心洗涤两次
2、收集沉淀细胞,加入8-10ml Hanks液配制成10%的鸡血细胞悬液
实验步骤——50%PEG溶液的制备
取一定量的PEG(Mr=4000)放入刻度离心管内,用试管夹夹住,在酒精灯上加热,使其溶化,待冷却到50—60℃时,加入预热的等体积Hanks液混匀,置37℃水浴箱中保温待用
实验步骤——细胞融合
1、取10%的鸡血细胞悬液1ml放入离心管中,加入5ml Hanks液混匀,1000r\min 离心5min,小心弃上清液;加入8—10ml Hanks液再次悬浮细胞,离心洗涤一次,弃上清液后将离心管倒置于滤纸上,尽量流尽残余液体。用手指轻弹离心管底壁,使细胞团松散。
2、取50%PEG ,在1min内逐滴加入到离心管中,边加边轻轻摇动混匀,将PEG全部加入后静止1—2min(此过程要在37℃的水浴中进行)
实验步骤——细胞融合
3、缓慢加入9ml Hanks液,轻轻吹打混匀,在37℃水浴中静止5min。
4、离心弃上清液,加入2—3ml Hanks液,在37℃水浴中温育20—30min。