真菌染色新方法的探索.docx

真菌染色新方法的探索【关键词】真菌菌种[摘要]目的:探索一种真菌染色新方法。方法:对传统染色法与改良染色法进行比较。结果:传统染色法镜下所见,菌丝体与孢子分离,底影不干净,影响观察;改良染色法使真菌孢子不易脱落,菌丝和孢子能保持自然形态,染色干净、清晰。结论:本方法简单、易掌握,非常适用于实验室大批量制片。[关键词]真菌菌种;盖玻片;棉兰染色液真菌的种类很多,在自然界分布极广,它的形态结构复杂,菌丝体和孢子的形态特征随真菌种类不同而异,是鉴别真菌的重要依据。传统的真菌染色方法,常常造成真菌孢子脱落,从而改变了它原有的形态构造,影响观察、鉴定[1]。我们经多次反复摸索,利用真菌菌丝体呈上耸向空间生长特征,用插片法使菌丝体生长在盖玻片上,这样制作的真菌染色片效果更为理想,在以往的文献中还未见报道。现将本方法报道如下。 、黑曲菌、黄曲菌、毛霉菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌等,以上菌种均为本实验室保存提供。(结晶品)20g,乳酸20ml,甘油40ml,棉兰(Cottonblue),蒸馏水20ml,将苯酚、乳酸、甘油溶解于蒸馏水中(可微加热),再加入棉兰,摇匀,备用。,葡萄糖40g,琼脂1g,蒸馏水1000ml,,20min,备用[2]。,各染片100张。试验组即改良的真菌染色法[4],将沙氏培养基倾注大平板,取无菌盖玻片沾上融化的沙氏培养基,密集竖立插在大平板上,将上述菌种用灭菌蒸馏水轻轻刮下,滴在大平板上,并轻轻摇动,使之均匀分布于平板表面,盖上平板盖,于2℃~2℃湿盒孵育,7h取出后,用镊子轻轻取出盖玻片,用火焰固定或自然晾干后,滴上棉兰染色液,h~h后,于水中轻柔漂洗,然后晾干,放载玻片上封片。对照组即传统的真菌染色法,在无菌载玻片上滴加融化的沙氏培养基1滴~2滴,将菌种接种在沙氏培养基上,加盖无菌盖玻片,于2℃~2℃湿盒孵育,7h取出后,揭开盖玻片,滴加染液,使真菌培养物与棉兰染液混合染色[3]。.2染色效果评判标准优片:镜下观察可见真菌菌丝体和孢子形态保持自然完整,孢子基本没有脱落,底影干净、清晰;良片:在镜下观察可见大部分菌丝与孢子形态较为完整、有少许脱落、底影较脏;差片:在镜下观察可见孢子与菌丝分离、脱落、底影脏,形态不完整。 2结果试验组:染片100张属优片有80张,良片有10张,差片有10张;对照组:染片100张属优片有10张,良片有10张,差片有80张。两组